Metodat për studimin e metabolizmit të proteinave. Studimi i metabolizmit të proteinave
Aktiviteti i lipazës së pankreasit
Klinike vlera diagnostike përkufizimet
Promovimi aktivitet lipaza e pankreasit shënohet në serumin e gjakut për pankreatitin të çdo origjine, në veçoritë - akute pankreatiti, në të cilin aktiviteti i enzimës rritet edhe në lëngun ascitik. Në pacientët me pankreatit, këshillohet që njëkohësisht të ekzaminohet aktiviteti i lipazës në gjak dhe urinë, pasi në këtë të fundit rritet më shpesh sesa në gjak. Medikamentet, provokimi i spazmës së sfinkterit të Oddi (narkotikët, analgjezikët, sekretina), heparina (stimulimi i çlirimit të lipazës) aktivizojnë këtë enzimë.
Performancë e ulët Aktiviteti i lipazës u gjet në pacientët me tuberkuloz, sifiliz, kancer dhe me të ndryshme sëmundjet infektive, dhe me përparimin e procesit patologjik, aktiviteti i enzimës zvogëlohet gjithnjë e më shumë.
Proteinat janë substanca me peshë të lartë molekulare që përmbajnë azot. Ekzistojnë proteina të thjeshta - proteina të përbëra nga 20 aminoacide të ndryshme, dhe proteina komplekse - proteina, të përbëra nga një proteinë dhe një përbërës protetik (jo proteinik). Përbërësit protetikë përfshijnë acidet nukleike, hemin, lipidet, acidin fosforik, etj. proteinat komplekse përfshijnë nukleoproteinat, kromoproteinat, lipoproteinat, fosfoproteinat.
Analiza biokimike zakonisht fillon me përcaktimin e përmbajtjes proteina totale në plazmën e gjakut (serum).
Ndryshimet në nivelet totale të proteinave mund të jenë absolute ose relative. Këto të fundit zakonisht vërehen me një rritje (ulje) të vëllimit të gjakut (plazmës). Kështu, hidraemia çon në hipoproteinemi relative dhe dehidratimi çon në hiperproteinemi relative. Në këtë drejtim, kur interpretohen treguesit e proteinave totale në serumin e gjakut (plazma), është e nevojshme të merren parasysh shqetësimet në metabolizmin e ujit.
Dehidratimi mund të fshehë hipoproteineminë absolute, pasi me këtë kombinim përqendrimi i proteinave në plazmën e gjakut nuk ndryshon gjithmonë nga norma. Nga kjo rrjedh se shkaku i hipo- dhe hiperproteinemisë mund të jetë jo vetëm një çekuilibër midis marrjes, biosintezës së proteinave, katabolizmit dhe largimit të saj, por edhe një ndryshim në vëllimin e hapësirës intravaskulare për shkak të pjesës së lëngshme (ujore) të gjaku. Është e qartë se patogjeneza e këtyre ndryshimeve është e ndryshme.
Për të dalluar ndryshimet absolute dhe relative në përmbajtjen e proteinave në plazmë, mjafton të ekzaminohet hematokriti ose të përcaktohet vëllimi i plazmës (gjaku).
Për shumicën dërrmuese të sëmundjeve kronike organet e brendshme, e shoqëruar me ndërrime në metabolizmin e proteinave, zbulohet hipoproteinemia, e cila zakonisht ka natyrë dytësore.
Hipoproteinemia absolute zbulohet kur sindromat patofiziologjike, e shprehur në ulje të biosintezës, rritje të katabolizmit, humbje jonormale, shpërndarja patologjike e proteinave midis sektorëve individualë të trupit. Shkaqet e hipoproteinemisë absolute janë:
1. Marrja e pamjaftueshme e proteinave nga ushqimi për shkak të urisë, kequshqyerjes, ngushtimit (ngushtimit) të ezofagut (për shkak të djegieve, tumoreve), integritetit dhe funksionit të dëmtuar. traktit gastrointestinal, me të zgjatur proceset inflamatore në muret e zorrëve dhe kushte të tjera të shoqëruara me përkeqësim të tretjes dhe përthithjes së proteinave Një rënie në nivelin e proteinave totale në plazmë (ose një tendencë për zhvillimin e hipoproteinemisë) vërehet edhe në sindromën e përthithjes së dëmtuar të ushqimeve proteinike. dhe një çekuilibër në përbërjen e tij aminoacide.
2. Shtypja e funksionit proteosintetik të mëlçisë, e vërejtur në hepatitin parenkimal, cirrozën e mëlçisë, si dhe intoksikimet e shkaktuara nga proceset qelbësore të zgjatura; neoplazite malinje tirotoksikoza, efekt toksik disa kimikate.
3. Rritja e zbërthimit të proteinave në trup, e shkaktuar nga nevoja për të kompensuar kostot e larta të energjisë, shoqërohet me mungesë të burimeve plastike. Shënuar kur djegiet termike dhe sëmundje djegieje, neoplazi malinje.
4. Humbja e proteinave nga trupi: me gjak gjatë akute dhe gjakderdhje kronike, me urinë në sindromën nefrotike (nefrozë, amiloidozë renale).
5. Lëvizja në inde të tjera me rritje të mprehtë të përshkueshmërisë së murit kapilar: formimi i edemës së gjerë, kalimi në hapësirën e tretë - me formimin e eksudateve, efuzioneve në zgavra seroze, në lumenin e zorrëve (me volvulus, peritonit).
6. Defektoproteinemia, d.m.th. çrregullime relativisht të rralla trashëgimore (të përcaktuara gjenetikisht) në sintezën e proteinave të gjakut.
7. Veçoritë e gjendjes fiziologjike të organizmit . Një përmbajtje e reduktuar e proteinave në plazmën e gjakut u vu re gjithashtu në disa kushtet fiziologjike: për shembull, tek gratë në muajt e fundit të shtatzënisë dhe laktacionit.
Hipoproteinemia relative. Dihet se perfuzioni i bollshëm i solucionit të glukozës dhe lëngjeve të tjera fiziologjike çon në një ulje të përqendrimit të proteinave për shkak të rritjes së vëllimit të pjesës së lëngshme të gjakut.
Më shumë se gjysma e sasisë totale të proteinave plazmatike (35-55 g/l) përbën albuminën. Albumina plazmatike ripërtërihet shpejt: brenda 24 orëve, 10-16 g të kësaj proteine sintetizohen dhe degradohen. Për shkak të përqendrimit të konsiderueshëm, hidrofilitetit të lartë dhe madhësive të vogla molekulat e albuminës kryejnë funksion i rëndësishëm për të mbajtur presionin e gjakut koloidosmotik. Kështu, ai merr pjesë në shkëmbimin e ujit midis gjakut dhe hapësirës intersticiale. Kur përmbajtja e albuminës është nën 30 g/l, presioni onkotik ulet aq shumë sa uji lëviz nga brenda në sektorin ekstravaskular.
Përcaktimi i niveleve të albuminës plazmatike luan një rol thelbësor në vlerësimin e ashpërsisë së sëmundjeve të shoqëruara me hipoalbuminemi.
Një vlerë diagnostike po aq e rëndësishme është përcaktimi i përqendrimit të albuminës në urinë.
Një rënie në nivelet e albuminës vërehet kur semundje kronike veshkat - sindromi nefrotik, si dhe djegiet, humbja e gjakut, sëmundjet infektive proceset purulente, pneumoni jospecifike, tuberkulozi i mushkërive dhe organeve të tjera, poliartriti akut dhe gjendje të tjera inflamatore, me tumoret malinje(kaheksia e kancerit), leucemia, anemia, dështimi i zemrës, infarkti i miokardit, humbja masive e proteinave përmes zorrëve.
Shfaqja e proteinave në urinë (proteinuria) vërehet në një sërë sëmundjesh të veshkave. Është zakon të dallohen organike (të shkaktuara nga dëmtimi i parenkimës së veshkave - sëmundjet inflamatore, sindroma nefrotike, ndonjëherë defekte te lindjes nefron) dhe proteinuria funksionale renale e shoqëruar me rritje të përshkueshmërisë filtri i veshkave ose një ngadalësim i rrjedhjes së gjakut në glomerula (nën ndikimin e hipotermisë, stresit fizik dhe mendor).
Proteinuria prerenale shoqërohet me zbërthim të shtuar të proteinave të indeve, hemolizë të theksuar; renale - e shkaktuar nga patologjia e veshkave (glomerulare dhe tubulare); postrenale - e shkaktuar nga patologjia traktit urinar dhe më së shpeshti - eksudimi inflamator.
Është zakon të diferencohen tre shkallë të proteinurisë: e moderuar - me humbje ditore të proteinave deri në 1 g, e moderuar - nga 1 në 3 g dhe e rëndë - më shumë se 3 g / ditë.
Shkaqet kryesore të proteinurisë janë:
1. rritja e përshkueshmërisë së filtrit glomerular ndaj proteinave të plazmës (proteinuria glomerulare);
2. reabsorbimi tubular i dëmtuar i proteinave të filtruara (proteinuria tubulare);
3. paraproteinemia dhe/ose rritje e niveleve të proteinave në gjak;
4. ndryshime në hemodinamikën renale;
Gjatë ekzaminimit të pacientëve me çrregullime të metabolizmit të proteinave, përcaktimi i fraksioneve totale të proteinave, albuminës dhe proteinave është me rëndësi diagnostike. NË praktika klinike Metoda kolorimetrike biurete është adoptuar si metodë e unifikuar për përcaktimin e proteinës totale. Avantazhi i metodës është mundësia e përdorimit të saj si kur punoni në laboratorë manualë me reagentë shtëpiak dhe reagentë Lachema, ashtu edhe kur punoni në ...
Parimi i metodës Proteinat në serumin e gjakut (plazma), duke reaguar në një mjedis alkalik me sulfat bakri, formojnë përbërje të ngjyrosura. vjollcë. Ky reaksion specifik i biuretit, karakteristik për peptidet dhe proteinat, është i zbatueshëm për përcaktimin fotometrik. Në serum njerëz të shëndetshëm përmban 65-78 g/l proteina totale, tek fëmijët nën 6 vjeç 5,6-8,5 g/l, tek të porsalindurit 5,3-8,9 g/l, në urinë - ...
Reagentët e nevojshëm: klorur natriumi, 154 mmol/l (tretësirë izotonike): 9 g klorur natriumi vendosen në një balonë vëllimore 1 litër, treten në ujë dhe hollohen deri në shenjë me ujë; hidroksid natriumi, 0,2 mol/l: 8 g hidroksid natriumi vendosen në një balonë vëllimore 1 litër, tretet me kujdes në ujë dhe hollohet deri në shenjë me ujë; jodur kaliumi, 30 mmol/l...
Prova eksperimentale: shtoni 5 ml tretësirë pune të reagentit biure në 0,1 ml serum dhe përzieni duke shmangur formimin e shkumës. Pas 30 minutash (dhe jo më vonë se 1 orë) matet në një fotometër në një kuvetë me trashësi shtresë 1 cm në një gjatësi vale 500-560 nm (filtri jeshil) kundrejt një kampioni bosh. Mostra e zbrazët: deri në 5 ml biuretë pune...
Rezultatet e përcaktimit të proteinës totale të serumit mund të rriten gabimisht në prani të lipidemisë, verdhëzës dhe hemolizës. Aplikimi i zgjatur i turniquet rrit përqendrimin e të gjitha proteinave në mostër. Mostrat e marra mbi vendndodhjen infuzion intravenoz, mund të japë rezultate gabimisht të ulëta për shkak të hemodilucionit lokal. Një rritje në përmbajtjen e proteinave prej më shumë se 90 g/l ndodh me hiperimunoglobulinemi, gammopati poliklonale ose monoklonale. Përmbajtja e reduktuar e proteinave...
Kur studiohet spektri i proteinave të gjakut, elektroforeza zonale me një medium mbajtës mbështetës përdoret si një metodë e unifikuar. Nën ndikimin e konstantes fushe elektrike Proteinat e serumit që kanë një ngarkesë negative lëvizin përgjatë letrës së lagur me një zgjidhje tampon drejt elektrodës pozitive me një shpejtësi në varësi të sasisë së ngarkesës dhe peshë molekulare grimcat. Si rezultat, proteinat e serumit ndahen në pesë fraksione: ...
Reagentët e kërkuar: bufer, mund të përdoren lloje te ndryshme tamponët - bufer medinal-veronal, borat, tris: bufer medinal-veronal pH 8,6: 10,3 g medinal dhe 1,84 g veronal treten dhe sillen në 1 litër me ujë; Tris bufer pH 8,9: tris-(hidroksimetil)-aminometan - 60,5 g, acid etilendiaminetraacetik (EDTA) - 6 g, acid borik- 4,6 g, ujë - deri në 1 l. zgjidhje...
Albumi është përbërësi kryesor onkotik i plazmës, shërben si rezerva kryesore e azotit në të, roli i saj në transportin e bilirubinës, acidet biliare, jonet metalike, barnat varen ndjeshëm nga përqendrimi. Nuk ka hiperalbuminemi absolute. Çdo gjendje e lidhur me humbjen e ujit rrit përqendrimin e të gjitha proteinave plazmatike, përfshirë albuminën, duke shkaktuar hiperalbumineminë relative. Ulja e përmbajtjes së albuminës ndodh në shumë sëmundje: akute dhe...
Testi i timolit i referohet reaksioneve koloidale-sedimentare, ose flokulimit, të proteinave të plazmës. Flokulimi (sedimentimi) i proteinave zakonisht ndodh kur ngarkesa e tyre ndryshon, sasia e ujit në shtresën e tretësirës zvogëlohet dhe madhësia e grimcave koloidale rritet. Parimi i metodës së testimit të Thymol bazohet në turbullimin e përzierjes kur serumi reagon me një tretësirë të ngopur të timolit në tampon Veronal. Kur buferi timol-veronal ndërvepron me proteinat e shpërndara në mënyrë të trashë...
Metabolizmi i azotit përfshin reagimet e sintezës dhe zbërthimit të proteinave, acidet nukleike, aminoacide, nukleotide, si dhe një sërë përbërjesh të tjera që përmbajnë azot. Për të vlerësuar gjendjen e metabolizmit të azotit, përcaktohen fraksionet e azotit të mbetur në serum ose në gjakun e plotë. Azoti i mbetur është nitrogjen ose azot joproteinik që mbetet në centrifugën (filtratin) e serumit të gjakut ose lëngjeve të tjera biologjike pas precipitimit të proteinave trikloroacetike, ...
68. Metodat për studimin e metabolizmit të proteinave në mëlçi, vlera diagnostike.
Roli i mëlçisë në metabolizmin e proteinave është shumë i madh: proteinat sintetizohen dhe depozitohen në të, aminoacidet, polipeptidet ushqimore dhe produktet e zbërthimit të proteinave të indeve hyjnë në të me gjak.
Këtu ndodh katabolizmi i tyre, neutralizimi dhe heqja e produkteve të prishjes së papërdorur. Disa aminoacide i nënshtrohen deaminimit dhe transaminimit. Amoniaku i çliruar shndërrohet nga mëlçia në ure më pak toksike. Nga aminoacidet, të sjella nga jashtë dhe të sintetizuara nga mëlçia, ajo ndërton përsëri proteinat e indit të vet, si dhe proteinat e gjakut; albumina, globulina (a dhe p, dhe deri diku y), fibrinogjeni, protrombina, heparina, disa enzima. Në mëlçi, formohen komponime proteinash me lipide (lipoproteina) dhe karbohidrate (glikoproteina).
Shkelja e funksionit të formimit të proteinave të mëlçisë zbulohet duke ekzaminuar proteinat në plazmën ose serumin e gjakut. Ky çrregullim ndikon jo aq shumë në sasinë totale të proteinave, sa në raportin e fraksioneve të tyre, një ndryshim në të cilin - disproteinemia - vërehet në shumicën e lezioneve të mëlçisë.
Metoda e elektroforezës së letrës, e cila aktualisht përdoret më gjerësisht në praktikën klinike, bazohet në faktin se në një fushë elektrike, proteina të ndryshme varen nga madhësia, forma e molekulës, ngarkesa e saj dhe faktorë të tjerë me me shpejtësi të ndryshme lëvizni drejt elektrodës pozitive. Gjatë elektroforezës në letër, përqendrohen fraksione të ndryshme të proteinave zona të ndryshme shirit letre, ku mund të identifikohen me ngjyrosje të përshtatshme. Madhësia e fraksioneve përcaktohet nga intensiteti i ngjyrës së secilit prej tyre. Proteinat e plazmës së gjakut ndahen në pesë fraksione kryesore - albumina; w, a2-, p- dhe y-globulinat. Elektroforeza në media të tjera (agar, xhel niseshteje, etj.) ju lejon të ndani proteinat në numër më i madh fraksionet.
Në sëmundjet e mëlçisë, rënia e raportit albuminë-globulinë (A/G) është më e zakonshme, kryesisht për shkak të uljes së përmbajtjes së albuminës (sinteza e dëmtuar e albuminës). Në inflamacionin akut të mëlçisë (hepatiti akut), vërehet një rritje e përmbajtjes së α2-globulinave në plazmën e gjakut, në inflamacionin kronik, kryesisht γ-globulinave, ndoshta për shkak të grumbullimit të antitrupave që lëvizin gjatë elektroforezës me γ-globulina; në të njëjtën kohë, sasia totale e proteinës së hirrës shpesh rritet gjithashtu. Në cirrozën e mëlçisë, përmbajtja totale e proteinave në serum bie ndjeshëm, kryesisht për shkak të albuminës; megjithatë, përmbajtja e γ-globulinave rritet ndjeshëm.
Fibrinogjeni gjatë elektroforezës në letër, ai migron me γ-globulina dhe nuk zbulohet veçmas. Për përcaktimin sasior, fibrinogjeni precipitohet nga plazma duke shtuar klorur kalciumi, pasuar nga peshimi i sedimentit të larë dhe të tharë ose përcaktimi i proteinës në këtë sediment pas tretjes së tij. Fibrinogjeni sintetizohet në mëlçi, prandaj, me dëmtime të rënda të mëlçisë, sasia e fibrinogjenit në plazmë zvogëlohet, gjë që mund të ndikojë edhe në koagulimin e gjakut. Përmbajtja normale e tij është 2-4 g/l, ose 8-14 mg/ml (200-400 mg% - pesha e mpiksjes; metoda Rutberg).
Proteina totale e plazmës përcaktohet më së shpeshti me metodën refraktometrike, dhe në mungesë të një refraktometri - me metoda kimike: Kjeldahl, reaksion biure, si dhe nefelometrike etj.
Mostrat e sedimentit të proteinave. Raporti i fraksioneve proteinike, përveç elektroforezës, përcaktohet me imunoelektroforezë, ultracentrifugim, etj. Përveç përcaktimit të drejtpërdrejtë të raportit të fraksioneve proteinike, përdoren një sërë testesh të thjeshta për të zbuluar praninë e disproteinemisë. Këto janë të ashtuquajturat mostra të sedimentit të proteinave (flokulimit). Thelbi i tyre është se me disproteinemi, veçanërisht me një ulje të përmbajtjes së albuminës, prishet stabiliteti i sistemit koloid të gjakut. Ky çrregullim zbulohet kur një elektrolit shtohet në serum në një përqendrim që nuk ndryshon serumin normal, por në disproteinemi shkakton turbullirë ose flokulim - flokulim proteinik. E njëjta gjë vërehet kur në gjak shfaqen proteinat patologjike – paraproteinat. Ky grup mostrash përfshin mostrat me klorur merkuri (Reaksioni Takata-Ara, Grinstead dhe testet e merkurit bruto), sulfat zinku, sulfat kadmiumi, tretësira e Lugolit etj Në një grup tjetër testesh flokulimi, reagjenti është një tretësirë koloidale, qëndrueshmëria e së cilës prishet kur nuk i shtohet. sasi e madhe Serum dis- ose paraproteinemik (timol, teste koloidale ari etj.).
Testi i timolit bazohet në përcaktimin e shkallës së turbulltësisë së reagentit timol koloidal kur i shtohet 1 Deri në një vëllim serumi. Është pozitiv kryesisht kur rritet përmbajtja e p-lipoproteinave në serum. Ky është një nga testet vazhdimisht pozitive për hepatitin viral dhe dëmtimin difuz të mëlçisë. Është negativ për verdhëzën obstruktive.
Me një rritje të ndjeshme të sasisë së globulinave dhe veçanërisht fibrinogjenit, testi i formolit - shndërrimi i hirrës në masë xhelatinoze (xhelatinizimi) nga shtimi i formaldehidit.
Të gjitha analizat e sedimentit (janë propozuar dhjetëra prej tyre) janë jospecifike, ndryshimet e tyre zbulohen jo vetëm në sëmundjet e mëlçisë, por edhe në mielomë, kolagjenozë etj. Këto analiza zbulojnë disproteineminë, por në mënyra shumë më të thjeshta dhe më të arritshme se elektroforeza.
Protrombina (faktori II i koagulimit të gjakut) sintetizohet vetëm në mëlçi me pjesëmarrjen e vitaminës K. Shkaku i hipoprotrombinemisë mund të jetë ose një shkelje e aftësisë së hepatociteve për të sintetizuar protrombinën, ose mungesa e vitaminës K të tretshme në yndyrë që hyn në mëlçi. nga zorra. Me verdhëzën obstruktive, kur përthithja e yndyrave, e bashkë me to dhe vitaminës K, dëmtohet, zvogëlohet prodhimi i protrombinës nga mëlçia dhe përmbajtja e saj në gjak. Për të përcaktuar shkakun e hipoprotrombinemisë, përdorni test me administrim parenteral të vitaminës K . Nëse pas kësaj rritet përmbajtja e protrombinës në serum, kjo do të thotë se funksioni protrombinformues i mëlçisë nuk është i dëmtuar. Ky test ndihmon në diferencimin e verdhëzës obstruktive nga verdhëza parenkimale. Protrombina përcaktohet nga shpejtësia e koagulimit të plazmës së rikalcifikuar në prani të tromboplastinës së tepërt.
Përcaktimi i përmbajtjes së produkteve të zbërthimit të proteinave. Ndër produktet e zbërthimit të proteinave, aminoacidet, ureja, azoti i mbetur dhe amoniaku kanë një rëndësi diagnostike. Total aminoacidet Niveli i gjakut rritet vetëm me dëmtime të rënda të mëlçisë, kur prishen funksionet e deaminimit dhe formimit të uresë, të cilat në përgjithësi janë mjaft të qëndrueshme. Kusht për rritjen e përmbajtjes azoti i mbetur gjaku në sëmundjet e mëlçisë është një dëmtim i njëkohshëm i funksionit të veshkave. Rritja e azotit të mbetur në dështimin e veshkave ndryshon nga ajo në insuficiencën hepatike-renale në atë që me të parën, përbërësi kryesor i azotit të mbetur është ureja, dhe me të dytën, aminoacidet përbëjnë një pjesë të konsiderueshme. Përcaktimi i veçantë i aminoacideve të gjakut duke përdorur kromatografi nuk ofron të dhëna mjaftueshëm të qarta diagnostike për dëmtimin e mëlçisë për të justifikuar një procedurë të tillë intensive të punës. Metoda e përcaktimit të kristaleve të leucinës dhe tirozinës në sedimentin e urinës, të cilat shfaqen në të gjatë distrofisë akute të mëlçisë, ruan njëfarë vlere diagnostike.
Përcaktimi i proteinës totale në serum/plazmë/gjak dhe lëngje të tjera biologjike.
Të gjitha metodat e njohura Përcaktimi i përqendrimit të proteinës totale në serumin e gjakut ndahet në grupet kryesore të mëposhtme:
1.Azotometrike, bazuar në përcaktimin e sasisë së azotit proteinik - metoda Kjeldahl dhe modifikimet e saj.
2.Metodat për përcaktimin e densitetit të serumit janë të pasakta, sepse dendësia varet jo vetëm nga përmbajtja e proteinave.
3. Peshimi - proteinat e serumit të gjakut precipitohen, thahen në një peshë konstante dhe peshohen në një bilanc analitik. Metodat janë intensive të punës dhe kërkojnë sasi të mëdha serumi.
4. Refraktometrik – jo perfekt, sepse një pjesë e përthyerjes përcaktohet nga përbërës të tjerë të serumit.
5.Kolorimetrike – më e përhapura është metoda e biuretës, e cila është e unifikuar.
6. Metodat e tjera - nefelometrike, polarimetrike, spektrofotometrike - nuk përdoren gjerësisht.
Industria vendase ka nisur prodhimin e kompleteve për studimin e përqendrimit të proteinës totale në serumin e gjakut duke përdorur reaksionin biure. I njëjti parim përdoret për të matur nivelin e proteinave totale në lëngjet biologjike duke përdorur reagentë të furnizuar nga kompani të ndryshme.
Përcaktimi i proteinës totale në serumin e gjakut duke përdorur reaksionin biure.
Reagentët.
1.0.9% tretësirë klorur natriumi /0.9 g klorur natriumi për 100 ml ujë të distiluar/.
Tretësirë 2.0.2N hidroksid natriumi, pa dioksid karboni /20 ml hidroksid natriumi 1N sillet në 100 ml me ujë të distiluar të zier/.
3. Reagenti biure: 4,5 g kripë Rochelle shpërndahen në 40 ml tretësirë hidroksidi natriumi 0,2 N, më pas shtohen 1,5 g sulfat bakri dhe 0,5 g hidroksid natriumi. Ruani në një enë qelqi të errët, tretësira është e qëndrueshme.
Tretësirë 4.0.5%. jodidi i kaliumit në tretësirë 0.2N hidroksid natriumi.
5. Tretësira e punës e reagentit biuretë: 20 ml reagent biuretë përzihet me 80 ml tretësirë jodur kaliumi. Zgjidhje raft.
6. Tretësirë standarde e albuminës nga serumi i njeriut ose i gjedhit: tretësirë albumine 10% në tretësirë 0,9% klorur natriumi /1 ml tretësirë përmban 0,1 g proteina - 100 g/l/.
Parimi i metodës.
Proteinat reagojnë në një mjedis alkalik me sulfat bakri për të formuar komponime me ngjyrë vjollce (reaksion biure).
Procedura e përcaktimit: shtoni 0,1 ml serum në 5 ml tretësirë pune të reagentit biuretë dhe përzieni duke shmangur formimin e shkumës. Pas 30 minutash \dhe jo më vonë se një orë\ matet në FEC në një kuvetë me trashësi shtresë 1 cm në gjatësi vale 540-560 nm \filtër me dritë jeshile\ kundër kontrollit.
Kontrolli: 0,1 ml tretësirë klorur natriumi 0,9% i shtohet 5 ml tretësirës së punës të reagentit biure, pastaj përpunohet si eksperiment.
Llogaritja kryhet sipas planit të kalibrimit.
Vlerat normale për proteinat totale janë 65-85 g/l.
Ndërtimi i një grafiku kalibrues.
Reagenti: tretësirë standarde e albuminës 10% në tretësirë 0,9% klorur natriumi, 1 ml prej së cilës përmban 0,1 g proteina. Për të përgatitur reagentin, mund të përdorni albuminë të liofilizuar nga kompleti "Bilirubin-standard" nga Lachem. Udhëzimet e kompletit tregojnë përmbajtjen e albuminës në mg. Bazuar në këtë, ne llogarisim se sa klorur natriumi 0,9% duhet të shtohet në një albuminë të caktuar për të marrë 0,1 g proteinë në 1 ml tretësirë.
Për shembull: Udhëzimet e kompletit tregojnë se albumina e liofilizuar përmban 160 mg albuminë. Llogaritja: tretësira standarde 10% përmban 10 g ose 10,000 mg për 100 ml
në standardin 160 mg në X
X = 1,6 ml, d.m.th. shtoni 1,6 ml klorur natriumi 0,9% në shishen që përmban albuminë dhe zbuloni se 1 ml nga kjo tretësirë përmban 0,1 g proteina.
Pas përgatitjes së tretësirës standarde, ne përgatisim një seri hollimesh pune prej saj sipas tabelës:
Llogaritja e përqendrimit të proteinave në g/l.
1 ml tretësirë standarde 10% përmban 0,1 g proteinë
0,04 g proteinë përmbahen në 1 ml tretësirë
X në 1000 ml
Nga çdo hollim pune i përqendrimit përkatës, merrni 0,1 ml në 3-4 epruveta, d.m.th. çdo përcaktim kryhet në 3-4 paralele dhe në çdo epruvetë shtohet 5 ml reagent biure. Pas 30-60 minutash, ngjyrosni në FEC kundër kontrollit. Ne marrim 3-4 lexime të densitetit optik për çdo përqendrim. Ne gjejmë mesataren aritmetike prej tyre, pasi më parë kemi hedhur poshtë leximet me devijime të mprehta.
Ndërtojmë një grafik kalibrimi: përgjatë boshtit të abshisave vizatojmë përqendrimin e proteinave në g/l, d.m.th. 40-60-80-100g\l; dhe përgjatë boshtit të ordinatave janë leximet e densitetit optik të marra në FEC \mesatarja aritmetike/.
Kurba e kalibrimit duhet të duket si një vijë prima e tërhequr përmes 3 pikave. Kjo kurbë është testuar në serumet e donatorëve \të paktën 3-4 përcaktime\. Kur merrni lexime normale të proteinave, d.m.th. brenda kufijve normalë; Në punim përdoret kurba e ndërtuar e kalibrimit.
Shënim.
1. Kurba e kalibrimit duhet të ndërtohet të paktën një herë në vit, si dhe çdo herë pas riparimit dhe në një kolorimetër fotoelektrik të sapo marrë.
2. Lidhja lineare ndërmjet densitetit optik dhe përqendrimit ruhet deri në D=0.5. Nëse serumi përmban sasi e madhe proteina, pastaj hirra hollohet klorid sodium dyfishuar.
Përcaktimi i uresë në gjak dhe urinë.
Ureja është produkti kryesor që përmban azot i katabolizmit të proteinave.
Kur proteinat shpërbëhen, amoniaku grumbullohet - substancë toksike. Mënyra kryesore për të neutralizuar amoniakun është sinteza e uresë në mëlçi. Përqendrimi i uresë në gjak varet nga shkalla e formimit të saj në mëlçi dhe largimi nga trupi përmes veshkave në urinë.
Në shumicën e pacientëve, shkalla e formimit të ure pasqyron shkallën e përdorimit dhe zbërthimit të proteinave qelizore.
Në patologjinë e rëndë të mëlçisë, aftësia e hepatociteve për të sintetizuar ure është e dëmtuar, amoniaku grumbullohet dhe përmbajtja e uresë në gjak zvogëlohet.
Ekskretimi i uresë që rezulton ndodh në urinë dhe varet nga funksioni ekskretues veshkave
Bëhet përcaktimi i uresë duke përdorur metodat e mëposhtme:
1. Metoda kimike me reaksion ngjyre me diacetil monooksim.
2. Metoda enzimatike (ureaza)
3. Metoda e “kimisë së thatë”.
Përcaktimi i uresë me reaksion me diacetil monooksim.
Reagentët.
1.Diacetil monoksim dhe tiosemikarbazid ose reagent në tableta.
2. Tretësirë referente ose standarde që përmban 100 mg ure në 100 ml ose 1 mg në 1 ml.
Përgatitja e solucioneve.
Tretësira e reagentit: shpërndahet 1 tabletë duke u ngrohur në një balonë vëllimore 50 ml në 30 ml ujë të distiluar. Pas ftohjes, sillni volumin në shenjë. Zgjidhja është e qëndrueshme për disa javë.
Tretësirë e acidit sulfurik: shtoni 150 ml ujë të distiluar dhe 25 ml acid sulfurik 96% analitik në një balonë vëllimore 250 ml. Ngroheni pas ftohjes dhe sillni volumin në shenjë. Zgjidhja është e qëndrueshme.
Një tretësirë pune e reagentit dhe acidit sulfurik përgatitet përpara reaksionit në një raport 1:1 (shih diagramin e përkufizimit).
Parimi i metodës.
Ureja formon një kompleks të kuq me diacetil monoksim në prani të tiosemikarbazidit dhe kripërave të hekurit në një mjedis fort acid, intensiteti i ngjyrës është proporcional me përqendrimin e uresë.
Ecuria e vendosmërisë.
Standardi i kontrollit të përvojës së reagentëve
1. serum 0.02 - -
2.zgjidhje pune
tretësirë e reagentit 2.0 2.0 2.0
b\solucion sulfurik
acide 2.0 2.0 2.0
3.madhësia standarde
ure - - 0,02
Zhyteni për 10 minuta në një banjë me ujë të valë. Ftoheni në rrjedhë për 2-3 minuta ujë të ftohtë. Kolorimetri jo më vonë se 15 minuta: filtër jeshil \në gjatësi vale 490-540\, kuvetë 1 cm, kontroll i kundërt.
Llogaritja: Më parë
X= -------- * C st në mmol\l, ku
Do - dendësia optike e eksperimentit;
Dst - dendësia optike e një solucioni ose standardi standard të uresë;
C st - përqendrimi i uresë në zgjidhje standarde;
X është përqendrimi i uresë në mostrën e serumit.
Për të kthyer mg% në mmol\l, përdoret një koeficient prej 0,1665.
Vlerat normale të uresë në serumin e gjakut janë 2,5-8,3 mmol/l.
Shënime.
1. Procedura e mësipërme e përcaktimit mund të modifikohet duke rritur vëllimet e të gjitha tretësirave të matura me 2-3 herë, në varësi të vëllimit të kuvetave.
3. Shndërrimi i vlerave të uresë në azot ure mund të bëhet duke shumëzuar me një faktor 0,466.
4. Tiosemikarbazidi është një reagent toksik. Kur punoni me të, duhet të ndiqni rregullat për të punuar me substanca toksike.
Në sëmundjet e mëlçisë, studimet e metabolizmit të proteinave kryhen veçanërisht gjerësisht, pasi gjendja e metabolizmit të proteinave dhe shqetësimi i saj reflektojnë gjendje funksionale mëlçisë.
Rëndësi ka rënia e përgjithshme e sasisë së proteinave në serumin e gjakut nën 6,5-8,5% dhe në veçanti ndryshimi i raportit të fraksioneve të saj, i cili normalisht është 4,5-5,5% për albuminat dhe 2-2,5% për globulinat. Ky raport korrespondon me një raport albuminë-globulinë prej 1,5-2,0.
Devijimi nga këto marrëdhënie tregon një çrregullim të metabolizmit të proteinave. Në veçanti, një ulje e albuminës shpesh tregon dëmtim serioz të parenkimës së mëlçisë, prandaj, një studim i pjesshëm i proteinave të gjakut përdoret për të studiuar metabolizmin e proteinave. I madh rëndësinë klinike ka një ulje të albuminës së gjakut nën 3.5%; prognoza bëhet e keqe kur ulet në 2.5%.
Ulja e sasisë së albuminës dhe rrjedhimisht një ulje e raportit albuminë-globulinë, së bashku me disa sëmundje ekstrahepatike (lodhje e përgjithshme), ndodh edhe në cirrozën e mëlçisë dhe hepatitin kronik.
Studimi i fraksioneve të proteinave
Hyrje në praktikë të metodës së elektroforezës, pra metodës së ndarjes së proteinës së hirrës në fraksione të veçanta gjatë kalimit rryme elektrike, bëri të mundur studimin më të detajuar të raportit të fraksioneve individuale, në veçanti globulinave. Në një mjedis alkalik, fraksionet e proteinave shpërndahen në atë mënyrë që albuminat e shpërndara imët janë të vendosura më afër anodës, pastaj a-1, a-2, b- dhe y-globulinat në rendin rritës të grimcave të proteinave. Këto të fundit, si më të shpërndara në mënyrë të trashë, janë më afër katodës. Përmbajtja e albuminës është mesatarisht 55-56%, a1-globulinat - 5-6%, a2-globulinat - 8-9%, i-globulinat - 13-14%, y-globulinat - 16-17%. Sasia e a2-globulinave rritet gjatë proceseve distrofike në IND lidhës, kolagjenoza dhe të tjera proceset patologjike, dhe sasia e globulinave rritet me degjenerimin e mëlçisë yndyrore. Një rritje e γ-globulinave, duke arritur në 30-50%, vërehet me cirrozë dhe hepatit difuz, një rritje e moderuar - me hepatiti akut dhe proceset inflamatore; është një tregues i besueshëm i kalimit të hepatitit në cirrozë. Një rritje e γ-globulinave konstatohet edhe në procese të ndryshme inflamatore.
Artikulli është përgatitur dhe redaktuar nga: kirurgVideo:
Të shëndetshëm:
Artikuj të ngjashëm:
- Në sëmundjet terapeutike, si me shumë sëmundje të tjera, biokimike e përgjithshme terapeutike...
- Niveli i globulinës rritet në dëmtimin akut distrofik të mëlçisë, në datat e hershme verdhëza obstruktive me amiloidozë...
- Studimi metabolizmin e karbohidrateve përcaktimi i sheqerit në gjak është i rëndësishëm për përcaktimin e çrregullimeve të metabolizmit të karbohidrateve...
