Анализы на хеликобактер пилори: как сдавать биоматериал и можно ли расшифровать результаты самостоятельно. Анализ кала на хеликобактер пилори: как его правильно сдавать? Пцр анализ на хеликобактер

19.10.2019

Бактерия Helicobacter pylori (хеликобактер пилори) обитает в клетках слизистой оболочки желудка и двенадцатипёрстной кишки человека. Некоторые штаммы (генетические типы) микроорганизма выделяют специфические токсины, разрушающие клетки и повышающие риск возникновения таких патологий, как хронические гастриты и дуодениты, язвенная болезнь желудка и двенадцатипёрстной кишки, некоторые виды злокачественных опухолейа. Такие штаммы необходимо своевременно выявлять и лечить. Одним из способов определения инфицирования Helicobacter pylori является анализ кала.

Механизм определения хеликобактера с помощью анализа кала

ПЦР (полимеразная цепная реакция), культуральный и иммунологические анализы кала относятся к прямым методам исследования. В отличие от косвенных методов, когда о наличии патологического агента судят по присутствию продуктов его жизнедеятельности или реакции иммунной системы организма (выработка антител), прямые методы обнаруживают непосредственно сам микроорганизм или его ДНК.
Все виды анализа кала на хеликобактериоз являются неинвазивными (нетравматичными) видами исследования в отличие от забора крови или гастродуоденоскопии.

Молекулярная диагностика

Для проведения ПЦР используют специальный прибор - амплификатор

ПЦР-метод является одним из видов молекулярно-генетической диагностики и позволяет определить наличие Helicobacter pylori даже в случае присутствия в материале небольшого фрагмента ДНК бактерии.

Суть метода состоит в многократном умножении анализируемого образца возбудителя заболевания. Для проведения реакции необходим своего рода «каркас», состоящий из двух праймеров – полученных с помощью искусственного синтеза фрагментов ДНК, идентичных нуклеиновой кислоте Helicobacter pylori. Во время реакции между праймерами наращивается цепочка ДНК в случае присутствия в кале фрагмента биоматериала микроорганизма. В случае его отсутствия реакции не происходит.

Реакция проводится при определённых значениях температуры и кислотности среды, состоит из нескольких десятков повторяющихся циклов, для катализа (ускорения реакции) применяется специальный фермент – полимераза. За 30 циклов фрагмент ДНК патологического агента, присутствующий в биоматериале, умножается в миллиард раз, что позволяет с точностью диагностировать инфекцию.

При наличии соответствующих праймеров можно выявить инфицирование цитотоксичными (повреждающими клетки слизистой желудка) видами Helicobacter pylori.

Культуральный анализ

Культуральный анализ (бактериологический посев) является микробиологическим методом исследования.

Биологический материал помещается в специфическую среду, благоприятную для роста бактериальной колонии. По истечении определённого срока (для Helicobacter pylori – более недели) культуру изучают под микроскопом, используя для верной идентификации колонии различные методы – окраску, способность вступать в те или иные биохимические реакции.

Кроме выявления патологического антигена (возбудителя заболевания) метод позволяет провести тест на его чувствительность к антибактериальным препаратам, что сокращает сроки и затраты на лечение, повышает эффективность терапии.

К сожалению, в некоторых случаях результаты теста на чувствительность in vitro («в пробирке») могут не совпадать с результатами лечения in vivo (живого организма): в жизни антибиотики, подобранные лабораторным методом, могут быть не столь эффективны.

Иммунологические методы анализа

Иммунологические методы основаны на свойстве антител слипаться с антигеном. Для исследования антитела со специальными метками соединяются с анализируемым образцом, в результате, при наличии в материале Helicobacter pylori, образуются комплексы антиген-антитело.

Показания к проведению обследования

Все виды диагностики инфицирования Helicobacter pylori имеют свои преимущества и недостатки. Целесообразность применения того или иного метода зависит от разных факторов и этапов лечения. Оптимальный способ исследования выбирает врач-гастроэнтэролог .

Показания к ПЦР-анализу кала:

язвы, и двенадцатипёрстной кишки;
атрофия слизистой оболочки желудка;
полипы, опухоли желудка;
гастроэзофагеальный рефлюкс (заброс содержимого желудка в пищевод), язва пищевода;
генетическая предрасположенность: злокачественные опухоли желудка у ближайших родственников (родителей, родных братьев и сестёр);

Исследование ПЦР-методом оптимально назначать для оценки целесообразности проведения специфического лечения антибактериальными препаратами при имеющихся органических повреждениях.

Показание к культуральному анализу – определение чувствительности к лекарственным препаратам при неэффективности эмпирического лечения. Поскольку анализ является сложным (посев требует специальной среды и отсутствия доступа кислорода) и долгосрочным, это исследование не назначается для диагностики инфекции.

Бактериологический посев способен выделять только спиралевидные формы Helicobacter pylori, но не кокковые, получившие в последнее время широкую распространённость. Этот факт дополнительно снижает ценность исследования.

Показания к иммунологическим методам:

симптомы функциональных и органических патологий желудка и кишечника:
- , отрыжка;
- боли, имеющие периодичность в течение суток с обострениями весной и осенью;
- поносы или запоры;
- ощущение дискомфорта, переполнения желудка;
перед назначением длительной терапии нестероидными противовоспалительными препаратами или ингибиторами протонной помпы (средствами для снижения выработки соляной кислоты);
железодефицитная анемия или тромбоцитопения невыясненной этиологии;
генетическая предрасположенность;
инфицирование ближайшего окружения;
контроль эффективности антибиотикотерапии.

Иммунологические методы и ПЦР без генотипирования назначаются с целью скрининга – ввиду простоты и относительно низкой стоимости исследование проводится широким массам населения для выявления группы риска развития органических и опухолевых поражений желудка и кишечника.

К сожалению, в России скрининг на Helicobacter pylori не получил широкого распространения.

Иммунологический анализ проводится до инструментальных методов исследования при соответствующей симптоматике и позволяет предположить инфицированность Helicobacter pylori. По результатам анализа в случае необходимости назначаются другие методы исследования.

Преимущества и недостатки ПЦР-анализа кала

Специфическая терапия хеликобактериоза антибактериальными препаратами – процесс длительный, сопровождающийся плохой переносимостью у многих больных и высоким риском развития осложнений.

Назначение антибиотиков всем лицам, инфицированным Helicobacter pylori, - порочная практика. Специфическая антибиотикотерапия показана лишь пациентам с тенденцией к прогрессированию органических поражений – эрозий, язв, атрофического процесса, - как правило, заражённым определёнными штаммами хеликобактера. Этим больным требуется антибиотикотерапия с целью достижения ремиссии при язвенной болезни и предупреждения риска развития злокачественных новообразований.

Выявить цитотоксичные типы Helicobacter pylori можно только посредством ПЦР-метода.

Преимущества ПЦР-анализа кала:

высокая чувствительность метода;
высокая специфичность теста;
простота и неинвазивность забора материала;
безопасность;
возможность выделения как спиралевидных, так и кокковых форм Helicobacter pylori;
возможность выделения различных штаммов бактерии.

Чувствительность теста – способность к выдаче истинно положительных результатов. Чем выше чувствительность, тем ниже доля ложноположительных результатов, когда антиген якобы выявляется у неинфицированных лиц.

Специфичность теста – показатель, зависящий от количества ложноотрицательных (когда у инфицированного больного антиген не выделяется) результатов исследования. ПЦР-метод исследования кала на Helicobacter pylori характеризуется чувствительностью 64–94% и стопроцентной специфичностью.

Собрать кал легко и просто. В отличие от забора крови или гастродуоденоскопии взятие материала не требует применения местных анестетиков, на которые может развиться аллергическая реакция, не причиняет боли и дискомфорта, безопасно в плане заражения «грязным» инструментом. Исследование не требует приложения определённых усилий, как, например, дыхательный метод, что делает его доступным даже для маленьких детей.

Недостатки ПЦР-анализа кала:

отсутствие возможности определения чувствительности к антибактериальным препаратам;
отсутствие возможности различать текущую инфекцию и успешно излеченную, когда фрагменты ДНК бактерии могут оставаться в фекалиях около месяца;
более низкий показатель чувствительности по сравнению с исследованием биоптата (образца ткани или клеточной массы) слизистой желудка;
относительно высокая стоимость анализа с генотипированием;
строгие требования к персоналу: квалификация, неукоснительное соблюдение правил, аккуратность.

Один из основных недостатков ПЦР-метода является продолжением его основного достоинства: высокая чувствительность теста является причиной ложноположительных результатов в случае контаминации («загрязнения» извне) анализируемого материала.

Подготовка к сдаче анализа

Достоверность результата любого анализа зависит от чёткого выполнения определённых условий на всех этапах, и забор материала – не исключение.

Правила взятия материала:

за трое суток до анализа отменяются антибиотики, слабительные, замедляющие перистальтику препараты, ректальные свечи и некоторые другие лекарства по наставлению врача, поэтому следует предупредить доктора о применении тех или иных лекарственных препаратов;
сбор кала осуществляется в выданную лабораторией посуду, рекомендуется отбирать пробы из трёх разных точек;
биоматериал желательно доставить в лабораторию немедленно; в случае отсутствия такой возможности пробу следует хранить при температуре 2–8 градусов не дольше 24 часов;
если анализ выполняется для оценки эффективности назначенной ранее антибиотикотерапии против Helicobacter pylori, кал собирается не ранее, чем через четыре недели после окончания лечения.

Замедление пассажа каловых масс, запоры могут приводить к разрушению хеликобактера в фекалиях, что является причиной ложноотрицательных результатов. Для повышения достоверности результата врач может назначить перед анализом лёгкое слабительное – лактулозу.

Как и где сдать анализ

Анализы назначает гастроэнтеролог, поэтому перед исследованием на Helicobacter pylori необходима его консультация.

Примерная стоимость исследования кала:

ПЦР-метод с генотипированием – 1200 рублей;
ПЦР без генотипирования – 600 рублей;
чувствительность к антибиотикам – 600 рублей;
иммунологические методы – 400–650 рублей (в зависимости от метода).

Для наиболее точной диагностики Helicobacter pylori необходимо выбирать медицинское учреждение, заслужившее хорошую репутацию.

Результаты исследования

Период обработки анализов, их достоверность зависят от метода определения антигена.

Сроки выполнения, достоверность и интерпретация результатов анализов кала на хеликобактериоз.

	Сроки	Достоверность	Результаты
ПЦР	от 5–6 часов (экспресс-метод) до 2 дней	высокая	1) отрицательный – не выделено ни одного заявленного генотипа бактерии; 2) положительный – хелибактериоз (текущий или в анамнезе), выделено не менее одного из заявленных генотипов
Бактериологический анализ на чувствительность к антибиотикам	7–10 дней	высокая – на чувствительность; низкая – на выявление антигена	1) количество бактерий 0 – хеликобактер не выделен; 2) количество >0 - хелибактериоз; 3) S – чувствительность к указанному антибиотику; 4) R – резистентность (устойчивость) к антибиотику; 5) I – умеренная чувствительность к антибиотику.
Иммунологические методы	1 день	низкая	1) отрицательный - возбудитель не выявлен; 2) положительный - хеликобактериоз

Низкая достоверность иммунологического и культурального анализа объясняется малымсодержанием антигена в фекалиях: если ПЦР-анализ чувствителен и при наличии 10 клеток, то для достоверного результата других методов клеток должно быть хотя бы в 10 раз больше.

Исследование кала на хелибактериоз безопасно, нетравматично и может осуществляться разными методами, позволяющими обнаружить инфекцию, определить штаммы вируса и чувствительность патогена к антибиотикам.

По результатам анализов можно сформировать группу риска, у представителей которой высока вероятность развития язвы желудка и двенадцатипёрстной кишки, злокачественных опухолей желудка; оценить степень риска и минимизировать его своевременным антибактериальным лечением цитотоксичных штаммов хеликобактериоза.

При разных заболеваниях желудочно-кишечного тракта требуется проходить комплексное обследование. Если выявляют бактерию Хеликобактер пилори в кале, то диагностируют гастрит, язву, дуоденит и другие более серьезные болезни. Собирать регулярно каловые массы на определение количества патогенных микроорганизмов требуется и во время медикаментозной терапии, чтобы была возможность следить за положительной динамикой терапии.

В каких ситуациях назначается?

Сдавать каловые массы на анализ требуется при разных патологических нарушениях в системе пищеварения. Бактерии Хеликобактер пилори определяют несколькими методиками, каждая из которых применяется при различных нарушениях. ПЦР анализ кала на антиген нужно сдавать в таких случаях:

язвенная болезнь желудка;
образование эрозий в 12-персной кишке и других органах ЖКТ;
атрофический процесс в слизистой оболочке;
полипы и новообразования;
гастроэзофагеальный рефлюкс, характеризующийся забросом желудочного содержимого в пищевод;
генетическая предрасположенность к разным патологиям органов брюшной полости.

ПЦР-исследование кала - самый точный метод контроля состояния микрофлоры желудка при лечении антибактериальными препаратами.
Патогенная микрофлора провоцирует нарушение стула.
Также можно сдать иммунологический тест, проводимый в таких случаях:
нарушенный стул, изжога, чувство дискомфорта и другие патологические проявление дисфункции пищеварительного тракта;
перед проведением курса приема антибиотиков;
железодефицитная анемия либо тромбоцитопения неопределенного происхождения;
генетический фактор;
наличие инфекции у ближайшего окружения.

Подготовка: что надо знать?
Антигенный анализ кала на наличие H. Pylori может дать ложные результаты, если не придерживаются следующие рекомендации:
За несколько суток до проведения лабораторной манипуляции отказываются от приема антибактериальных и слабительных медпрепаратов. Если терапию прекратить невозможно, то о ней предупреждают доктора.
Собрать материал для обследования необходимо в предварительно помытую тару, лучше использовать стерилизованную емкость, которую приобретают в аптеке. Категорически запрещено для анализа на Хеликобактер пилори использовать кал после клизмы или применения препаратов со слабительным действием. В таких случаях достоверность результатов низкая.
Собранный материал доставляют в лабораторию не позже, чем через 12 часов после забора. Если сразу же не удалось сдать анализ на диагностику, то материал хранится на протяжении суток при температуре 2-8 градуса.
Повторный анализ кала на Хеликобактер пилори сдается спустя месяц после проведения антибактериальной терапии.

Особенности проведения

ПЦР - основной молекулярный способ диагностики

Молекулярно-генетическая диагностика выявит наличие фрагментов ДНК бактерии.
Исследование каловых масс на полимеразную цепную реакцию позволяет выявиться ДНК и РНК бактерии Хеликобактер пилори. Методика относится к молекулярной биологии, вследствие которой фрагменты ДНК патогенного микроорганизма увеличивают в многократном размере. Проводят анализ кала на ПЦР при помощи таких средств:
Праймер. Помогает обнаружить и обозначить необходимый фрагмент.
Полимераза. Фермент, который копирует зафиксированный участок цепочки ДНК.
DNTP. Химические вещества, необходимые для выстраивания новой цепи.
Образец для анализа.
Буферный раствор. Посредством жидкости создается максимально приближенной условие для полимеразной цепной реакции.

Методом ПЦР удается накопить специфические участки ДНК в геометрической прогрессии, вследствие процедуры получается из 1-й молекулы больше 100 млн таких же. При помощи такого лабораторного способа исследования кала возможно определить присутствие Хеликобактер пилори даже в небольшом объеме. Если цепь при диагностике не образуется, значит результат теста негативный.
Преимуществом метода ПЦР является автоматизированность, при котором человек принимает минимальное участие в обследовании.

Культуральная методика

Суть анализа в создании питательной среды для жизнедеятельности бактерии.
Хеликобактер пилори может быть обнаружен посредством бактериологического посева кала. Способ диагностики относится к микробиологическим методам. Полученный материал помещают в особую среду, которая является благоприятной для размножения бактерии. Через определенный временной промежуток изучают выросшую культуру при помощи микроскопа. При лабораторном исследовании применяется окрашивание и другие способы, помогающие верно идентифицировать колонию. Помимо этого, выполняется тест на чувствительность к антибиотикам, благодаря чему проще подобрать лечение против Хеликобактер пилори.

Диагностический анализ на выявление в организме микроорганизма Хеликобактер Пилори посредством проведения ПЦР распространен во всем мире. Для проведения анализа достаточно сдать кал, никаких инвазивных процедур не требуется (как, например, в случае с ФГДС методом диагностики).

Самыми серьезными минусами этой процедуры считают сравнительно низкую точность и неудобство в сдаче материала для анализа.

ПЦР анализ на наличие в желудочно-кишечном тракте бактерии Хеликобактер Пилори проводится практически во всех, как государственных, так и частных медицинских центрах, в которых имеется своя лаборатория. Назначение на проведение данного вида исследования можно получить у врача-терапевта, гастроэнтеролога и иммунолога.

Прохождение исследования по направлению актуально только для государственных медицинских учреждений. В частных центрах анализ можно проводить без направления, просто по собственному желанию.

Процедура это платная. Цена на ПЦР обследование может отличаться в зависимости от клиники и от города. Например, в Москве данное исследование стоит около 600 рублей, тогда как в регионах обойдется в 250-350 рублей. В частных клиниках, по данным на 2016 год, цена выше на 5-10%: в районе 650 рублей для столицы.

Насколько точен тест?

Современные исследования указывают на достаточно высокую точность ПЦР анализа кала на наличие бактерии Helicobacter Pylori. Чувствительность теста колеблется в диапазоне между 64-94%.

Некоторых пациентов может смутить столь большой разброс в чувствительности теста. Однако стоит понимать, что в медицине нет идеально точных диагностических методик, а показатель в 64-94% является более чем удовлетворительным. Для более точного диагноза следует сочетать этот метод с другими способами выявления Хеликобактер (анализ крови, дыхательный тест, и так далее).

Диагностика и лечение Хеликобактер (видео)

Преимущества и недостатки метода

К преимуществам ПЦР анализа кала относят:

Немалую чувствительность (точность) метода.
Не требуется инвазии (проникновения, как при ФГДС) для выполнения процедуры, а сама процедура технически очень проста.
Абсолютная безопасность для здоровья пациента.
Возможность обнаружения различных штаммов и форм бактерии Helicobacter Pylori.
Возможность с этой же пробы сразу провести анализы и на другие заболевания.

К недостаткам ПЦР анализа кала относят:

невозможность определения чувствительности к антибиотикам;
невозможность отличить прошедшую инвазию Хеликобактер Пилори от существующей;
сам метод доступен не в каждом медицинском центре.

Общее описание и виды метода

ПЦР тест на наличие в ЖКТ микроорганизма Helicobacter Pylori основан на молекулярно-генетическом анализе многократного умножения образца бактерии Хеликобактер Пилори. Стоит отметить, что для этого метода диагностики берется не кровь, а кал.

ПЦР анализ проводится с помощью двух способов:

культурального;
иммунологического.

При культуральном ПЦР анализе биологический материал кладут в чашку Петри, в которой заблаговременно создаются благоприятные условия для размножения Хеликобактер Пилори.

Через 5-7 дней проводится осмотр чаши и если в ней за этот срок развилась колония микроорганизма Helicobacter Pylori, то результат является положительным. К сожалению, на точность этого метода могут повлиять выпитые накануне антибиотики, о чем пациенты должны быть осведомлены.

При иммунологическом виде ПЦР анализа маркированные антитела помещают в анализируемый образец. В итоге, при наличии бактерии Хеликобактер Пилори, можно увидеть образование специфических комплексов антиген-антитело, что говорит о положительном результате анализа.

Подготовка и сдача анализа

За трое суток до проведения теста следует отменить прием антибиотиков, слабительных средств, ректальных свеч и замедляющих перистальтику лекарств. При невозможности отмены препаратов из списка (по жизненным показаниям) требуется консультация с врачом.

Сбор кала для анализа осуществляется исключительно в выданную в больнице или лично приобретенную специальную медицинскую тару (ее можно купить в любой аптеке).

Доставлять исследуемый биоматериал нужно как можно быстрее. При невозможности быстрой транспортировки следует хранить тару с биоматериалом при температуре в +3-9 градусов, но не более суток с момента сбора.

Важно: если анализ проводится повторно, после проведения антибактериальной терапии, тест нужно проводить не ранее четырех недель после окончания лечения. В иных случаях он будет неэффективен и покажет ложный результат.

Расшифровка и нормы

Расшифровка результатов для бактериологического метода ПЦР исследования:

количество микроорганизмов 0 - микроорганизм Хеликобактер Пилори не выделен (норма);
количество больше 0 - наличие хелибактериоза (подтверждается даже в том случае, если больной не имеет симптомы болезни), требуется лечение;
S - чувствительность к указанному в результате антибиотику;
R - резистентность (полная устойчивость) к указанному в результате антибиотику;
I - умеренная чувствительность к указанному в результате антибиотику.

Расшифровка результатов для иммунологического метода ПЦР исследования:

отрицательный результат - микроорганизм Helicobacter Pylori не выделен;
положительный результат - наличие хеликобактериоза, требуется лечение.

Проблемы в желудочно-кишечном тракте доставляют дискомфорт, мешают жить привычной жизнью. Болезненные спазмы, тошнота, тяжесть, отрыжка – симптомы, разрушающие любые планы, выбивающие из колеи. Виновник проявлений – бактерия хеликобактер пилори, способная поражать слизистую оболочку внутренних органов.

По сравнению с аналогичными бактериями, хеликобактерия пилори комфортно себя чувствует в кислой среде. Поэтому желудок является для нее любимым местом пребывания. Вращающиеся жгутики и форма спирали позволяют элементам передвигаться по густой слизистой.

При неблагоприятных условиях бактерии принимают форму круга и затихают в организме.

Анализ кала на хеликобактер проводится такими методами как: ПЦР, культуральный, иммунологический. Точность ПЦР – до 95%. Это самый простой вид диагностики, рекомендуемый детям, больным в тяжелом состоянии, пожилым.

Анализ с помощью ПЦР

Провоцирующие факторы

100% показание для анализа – язва желудка и 12-типерстной кишки. Помимо этого, назначают подобную диагностику в следующих случаях:

онкология;
лимфома желудка;
атрофический, хеликобактерный гастрит;
дисплазия части пищеварительного тракта;
рак желудка в анамнезе (первая линия);
болезнь Менетрие;
диспепсия дольше 6 месяцев;
длительное употребление ингибиторов протонной помпы;
заболевания крови.

Симптомы при наличии хеликобактерной инфекции

Признаки наличия бактерии могут проявиться не сразу. Развитию заболевания способствуют такие факторы как:

несбалансированное питание;
стрессовые ситуации;
низкий иммунитет.

Инфицирование происходит через еду, жидкость, при контакте с больным (чихание, кашель). Если хеликобактер пилори активизировалась, то человек ощущает тошноту, изжогу, присутствует плохой аппетит, тяжесть после принятия пищи, неприятный запах из ротовой полости.

Один из признаков заражения хеликобактерией — неприятный запах изо рта

Симптомы похожи на проявления гастрита, поэтому для обнаружения пилори важно пройти обследование, сдать анализы.

Подготовка к сдаче материала

За 30 дней до исследования нежелательно пить синтетические препараты и лекарства, стимулирующие сокращение стенок желудка. Помимо этого, за 3-е суток до забора материала рекомендуется не употреблять в пищу красящие продукты (красное вино, свекла, черная смородина).

Также не стоит есть морковь, капусту, отруби, поскольку в них содержится грубая клетчатка.

Кал собирается в специальную тару для анализов. Ее можно приобрести в аптеке. Фекалии должны заполнить треть контейнера, этого будет достаточно для исследования. Нельзя брать испражнения из унитаза, поскольку в него могут попасть дезинфицирующие средства.

Экскременты должны быть доставлены в лабораторию как можно быстрей (в ближайшие два часа). Хранить их можно до 12 часов при температуре от -8°С до +2°С.

Культуральный метод

Бактерия в виде спирали в экскрементах почти никогда не встречается. Испражнения являются неподходящей средой для вредного микроба. Попадая в толстый кишечник, пилори принимает форму круга. В кале изредка она наблюдается именно в этом виде.

Культуральный тип исследования – посев кала на комфортную среду для дальнейшего размножения хеликобактер пилори. Далее колонии растут, изучаются лаборантами, окрашиваются химическими препаратами и отправляются на исследование под микроскоп. Подобные манипуляции позволяют выращивать патогенные микроорганизмы, анализировать их.

Помимо обнаружения пилори, метод способен установить чувствительность инфекции к определенному лекарству. Если в процессе исследования к бактерии добавить антибактериальное средство и рост колоний останется прежним, то можно говорить об устойчивости. При гибели микроорганизмов имеет смысл прописать данный медикамент человеку для лечения.

Действие будет верным в случае обнаружения спиралевидной формы хеликобактер пилори. Культуральное исследование не имеет популярности по таким причинам, как:

Иммунологический метод

Испражнения человека подвергаются исследованию, позволяющему выявить антитела хеликобактер пилори. Для этого берутся определенные белковые соединения, способные обнаруживать чужеродный антиген. Могут быть найдены части хеликобактер пилори, продукты ее жизнедеятельности.

При взаимодействии с антигеном, антитела бактерии создают свой комплекс. Именно его и определяет иммунологический способ. Подобный разбор микробов в РФ проводится редко, хотя лаборатории оснащены всем необходимым.

ПЦР

Популярный способ выявления хеликобактер пилори в экскрементах. Точность высокая, поэтому во всех клиниках используют практически только его. Процесс анализа заключается в выделении участка ДНК бактерии из испражнений. После этого выделенная часть дублируется на аппарате, восстанавливающем генетический код.

При достижении нужных размеров, остаток бактерии сравнивают с эталоном, определяют хеликобактер пилори. Положительный ПЦР – знак присутствия бактерии в кишечнике, части ДНК совпали с оригиналом.

Достоверность анализов

ПЦР является самым достоверным методом распознавания бактерий из трех описанных. В некоторых случаях он уступает эндоскопии и биопсии. Цепная реакция редко дает ложноположительный ответ, имеет высокую специфичность. Кроме того, метод позволяет исследовать кокковые формы хеликобактер пилори.

На заметку! Культуральный и иммунологический методы менее достоверны, чем ПЦР. Причина в частых ложноположительных ответах. Но если их применять в совокупности с аналогичными исследованиями, то они будут хорошим подспорьем для установления диагноза.

Расшифровка

Если кал исследуется методом цепной реакции, результат будет отрицательный или положительный. Соответственно, в первом случае не будет выявлено бактерий в испражнениях, во втором – обнаружена специфичная молекула хеликобактер пилори.

Анализ на посев биоматериала подразумевает оценку качества и количества микроорганизмов в специфичной среде.

Рост бактерий имеет 4 ступени

Подходящая, водянистая среда. Незначительный рост микробов. Твердая среда – организмов нет в поле зрения.
Определенный тип бактерий может расходиться до десяти колоний.
Твердая среда. Значительное разрастание пилори.
Рост бактерий создает более ста колоний.

3 и 4 степени говорят о воспалении, которое спровоцировала определенная бактерия.

Если в кале обнаруживается хеликобактер пилори, это не означает, что есть язва или подобные заболевания. Определяется лишь наличие возбудителя болезни. При обильном заселении слизистой желудка хеликобактер пилори, можно говорить о гастрите, язвенной болезни, панкреатите.

После указания степени пишется зараженность, обозначаемая плюсами:

+ количество бактерий менее 20 в поле зрения;
++ не более 50;
+++ показывают более 50 бактерий.

Таблица. Степень зараженности

На результаты анализов влияет множество факторов, включая подготовку к исследованию, время хранения материала до отправки в лабораторию. Чтобы получить максимально достоверный ответ, важно соблюдать все предписания и рекомендации врача.

Видео – Анализ кала на хеликобактер

После заражения микроб появляется во многих средах организма. Так что становится возможным анализ на хеликобактер пилори по биохимии крови, слюне, калу и так далее. Вопрос об этом решается по наличию соответствующих возможностей у местной лаборатории. Анализ крови на проводится с целью выявить наличие антител IgG и некоторых других комплексов, формируемых под действием антигенов (CagA и другие). Расшифровка анализа ведётся по таблицам. Так норма в крови этих веществ известна.

Золотым методом у медиков считается вовсе не анализ крови на хеликобактер пилори. Рекомендуется сделать биопсию с последующим посевом образца на питательные среды. Это как результативный анализ хеликобактер, так и путь для определения чувствительности культуры к лекарственным препаратам.

В сыворотке быстро формируются антитела к хеликобактер пилори. Картина характеризуется количественным изменением интелейкинов:

Повышение числа IL-6, 8 и 10.
Снижение количества IL-2.

Однако в исследованиях, проведённых на подростках, обнаружено несоответствие картин у детей и взрослых. С 14 до 17 лет у людей не зафиксировано количественного изменения цитокинов. Подростки сдали кровь на хеликобактер, и не выявилось никаких различий по содержанию интерлейкинов, факторов некроза и интерферонов.

Что такое цитокины

Цитокины пока ещё недостаточно изучены, так что диагностика в этом плане носит скорее предположительный характер. О чем и было сказано выше. Медики пока ещё выясняют соотношения между понятиями хеликобактер пилори, анализ крови, норма и цитокины.

Описываемые структуры представляют собой белковые комплексы, формируемые как ответ иммунной системы. По конфигурации цитокины близки к гормонам, а функции их пока что не изучены. Вот некоторые предположения на этот счёт:

Контроль за производством клеток крови и их дифференцированием.
Балансировка иммунной системы.
Регулировка процессов воспаления.
Поддержание нормального давления крови и её свёртывания.

Цитокины сегодня постоянно пополняются новыми представителями класса. Медики делят их на классы следующим образом:

Интерлейкины.
Интерфероны.
Хемокины.
Монокины.
Лимфокины.
Колониестимулирующие факторы.

Когда велось исследование новой тогда ещё инфекции хеликобактер пилори, медики обнаружили в цифрах повышенный фон IL-1 бета и IL-6 (на слизистой, а не в крови). Со временем стало ясно, что неадекватные реакции иммунной системы, которая отказывается бороться с инфекцией и постепенно переключается на аутоиммунные реакции, обусловлены формируемыми цитокинами. Указанные вещества проникали в цитоплазму клеток и межклеточное вещество.

Вот почему сегодня положительный анализ крови расшифровывается, как источник проблем в области сердечно-сосудистой системы, кожных заболеваний, анемии и других. При в первую очередь фиксируется снижение уровня факторов некроза опухоли альфа, IL-8 и IL-1 бета.

Не все штаммы провоцируют подобные изменения, а те, которые содержат антиген CagA. IL-8 – провокатор воспаления в организме.

Антитела

Когда медики столкнулись с проблемой замены биопсии ввиду сложности проведения процедуры, то выдумали сонм иных методик. Исследования на антитела в крови относятся к этому разряду. Анализ считается неинвазивным, хотя проводится при помощи шприца. Первоначально исследование на антитела напоминало то, что проводится для кампилобактера. Посредством перекрёстной реакции антигенов медики решали вопрос о присутствии их в сыворотке крови.

Что касается исследований на специфические факторы, например, CagA, то было вынесено решение о нецелесообразности такого подхода из-за плохой чувствительности.

Наличие IgG не указывает на присутствие инфекции. Удаётся обнаружить при анализе этот фрагмент в течение продолжительного времени. Из-за резкого снижения носителей инфекции в развитых странах удаётся определить наличие IgG у тех, кто давно уже получил негативный статус присутствия микроба.

Постепенно титры антител падают. Требуется парный анализ (до и после лечения), чтобы понять, каков диагноз. Потому единые цифры не удаётся выявить для отдельно взятого пациента. Снижение титров длится десятилетиями. Сегодня медики предлагают оценивать успех лечения по 50% снижению за 6 месяцев. Этот признак отличается повышенной чувствительностью (97%) и специфичностью (95%).

Сегодня тесты на иммуноглобулины IgA и IgM не одобряются в развитых странах. Поскольку показатели достоверности желают лучшего.

Прочие маркеры присутствия инфекции

Помимо морфологических признаков, регистрируемых инструментальными методиками (гастрит, язва и так далее), выделяют клинические признаки, как например, сильный голод. Это обусловлено биохимическим составом крови – повышенным уровнем гастрина. Слабоположительный прирост уровня пепсиногена рассматривается как фактор риска развития язвы. Однако этот фактор указывает не на формирование заболевания, а выявляет в крови маркер присутствия хеликобактера.

Сначала этот признак отнесли к генетически заложенному в организме человека. Поскольку то же характерно при аутоиммунном гастрите. Однако повторный анализ ситуации показал, что бактерия – причина. Так что медики уровень пепсиногена и гастрина в крови считают весомым доводом в пользу выставляемого диагноза. Так при росте соотношения пепсиногенов I и II на 25% пора уже присмотреться. Фурута сообщает о специфичности этой методики в 90% случаев и чувствительности – 95%.

Гипотеза проверялась путём оценки титров IgG после лечения инфекции. Через 2 недели после излечения медики зафиксировали снижение гастрина. Однако, чтобы сдать тест крови по этой методики, придётся выполнить его дважды с интервалом 6-12 месяцев.

Анализ результата

Результат оценивается, например, по той сумме, которую дают антитела к хеликобактер (иммуноглобулины А, М и G):

0,8 – суммарные показатели указывают на негативный ответ о наличии диагноза.
0,8 – 1,1 – требуется дополнительное исследование.
Свыше 1,1 – значит, что в желудке локализована инфекция.

Исследования кала

Бактерия обнаруживается в испражнениях, так что анализ кала на хеликобактер – неотъемлемое исследования на бактерию. Однако стул анализируется на антиген. В США (штат Цинциннати) уже разработан комплект количественной оценки кала на наличие нужных молекул.

В основу заложен иммуноферментный анализ, чувствительность которого к антигену составляет 185 нг/мл. Подготовка сильно напоминает то, о чем было написано выше в отношении проб крови. На антитела из состава оборудования осаждаются антигены (посредством белковых механизмов идентификации). Однако это не даёт представления о том, как лечить инфекцию. То, что антиген в кале, показывает наличие бактерии в желудке.

Поликлональные антитела, связанные с пероксидазой, и пробу инкубируют в течение 1 часа. Затем материал наносится на лунки и выдерживается 10 минут. Связанный фермент изменяет цвет, регистрируемый спектрофотометрическими методами. Для фиксации результата (чтобы остановить процесс) добавляют стоп-раствор.

Результат по достоверности сравним с гистологическим исследованием биопсии. Медики даже не берутся сказать, какой самый точный. Однако ошибки (5%) все-таки встречаются. С биопсией это случается реже.

Медики обратили внимание на зависимость качества ингредиентов, поставляемых вместе с набором, а также значение профессионализма сотрудников лаборатории. Реактивы получают из подопытных кроликов, и стандартизация сильно осложнена из-за недостатка знаний о нужных технологиях.

Исследование кала по результативности сравнивается с тестом дыхательным. Этим путём проводится определение достоверности результатов, полученных по крови.

Методики оценки присутствия инфекции

Помимо того, как сдаётся анализ, как берут пробу, выделяют пути оценки нужных параметров. Выше приведены сведения о биохимических и иммуноферментных разновидностях. Но точный – ПЦР. Это клонирование участков ДНК при помощи специальных реакций, что позволяет обнаружить бактерию.

Этот метод считается сегодня перспективным. В особенности, когда речь идёт о дизентерии. ПЦР на определение микроба в кале затруднено, так как наличие специфических компонентов препятствует протеканию реакции. Это мешает правильно понять результаты. К тому же, некоторые участки ДНК схожи с теми, что выявлены у других бактерий (которых в испражнениях много). Поэтому тест в этом случае не считается оптимальным, а стоит дороже, нежели дыхательный.

Однако ПЦР позволяет быстрее обнаруживать мутации ДНК, обусловливающие резистентность класса к тем или иным медицинским препаратам. Так что достоверность отходит на второй план перед перспективами, открывающимися исследователям (в научном, а не клиническом смысле).

Общие инструкции по выбору

Из сказанного понятно, что одно обследование дополняет другое. Они не альтернатива друг другу. Проверяйтесь по той и другой методике, чтобы правильно диагностировать заболевание. Этим методы дополняют собой .

По большей части оба применяются уже после лечения для оценки успешности эрадикации. С целью определения титра, где повышен эффект присутствия антител. Если речь идёт о диагностике, то сдаётся в лаборатории кал. Поскольку так обнаруживается присутствие микроба в ЖКТ. Что касается крови, то наилучшие результаты получаются при двух разнесённых по времени пробах. Что далеко не во всех случаях уместно.

Чаще делается всё-таки дыхательный тест, который люди иной раз сдают в домашних условиях. А кровь при необходимости берётся медиками в клинике. Проверенным случаем считается тот, когда при ФГДС проводится взятие биопсии с последующим высеванием на питательную среду. Лучше пока что ничего не придумано.

А рассматриваемые виды – вспомогательные методики. Если речь идёт об экспресс-анализе, исследование кала помогает уточнить диагноз. Если о лечении – состояние крови характеризует результативность эрадикации. Желающим определить наличие микроба лучше начинать с дыхательного теста, как безобидного и простого в реализации.