Бактериологическая лаборатория -лаборатории, параклиники. Бактериологическая лаборатория: специальная мебель, одежда и посуда Назначение стеклянных бус в бактериологической лаборатории

Бактериологическая лаборатория - это научно-практическое учреждение, выполняющее , иммунологические и другие микробиологические исследования. Различают медицинские, ветеринарные и промышленные бактериологические лаборатории.

Медицинские бактериологические лаборатории организуются при , санитарно-эпидемиологических станциях и т. п. для проведения исследований в целях уточнения диагнозов и санитарно-эпидемиологического контроля. При бактериологической лаборатории имеются: средоварня, мойка, препараторская, стерилизационная и . Устройство и оборудование бактериологических лабораторий должны быть приспособлены для выполнения исследований в стерильных условиях, гарантирующих персонал от возможного заражения. Помещение бактериологической лаборатории должно быть светлым и просторным. Необходимо исключить возможность сквозняков. Специальное место отводится для окраски препаратов.

Обязательным оборудованием рабочего места бактериолога являются горелка, банка с раствором карболовой кислоты для использованных пипеток, закрывающийся сосуд для , штативы для пробирок и бактериальной петли, эмалированные кюветы, пинцеты, ножницы, скальпель, предметные и покровные стекла. В бактериологической лаборатории должны иметься металлические подносы для чашек Петри, оцинкованные ведра или баки для сброса использованной посуды. Помимо обычной лабораторной посуды, бактериологические лаборатории снабжается специальными видами посуды: для выращивания на плотных средах, бактериальные матрацы и др. Необходимы также резиновые груши для насасывания в пипетки особо опасного материала. Бактериологическая должна быть чисто вымыта, стерилизована термообработкой и закрыта стерильными ватными пробками. Для посуды не следует применять химических средств, так как их следовые количества могут повлиять на развитие микробов. Важнейшими для бактериологической лаборатории являются приспособления для посевов микроорганизмов (бактериальные петли, пастеровские пипетки, стеклянные и платиновые шпатели). Для проведения посевов в асептических условиях бактериологические лаборатории оснащаются специальными застекленными боксами, оборудованными ультрафиолетовыми лампами (см. ).

Бактериологической лаборатории необходимы: холодильник для хранения , сывороток и других биологических субстратов; микроскоп с осветителем; центрифуга; или термостатная комната для выращивания бактерий; аппарат для встряхивания различных смесей; , суховоздушный стерилизатор (печь Пастера) для стерилизации , посуды и электрические стерилизаторы. Подсобные помещения для работы с лабораторными животными, для мойки и сушки посуды, для розлива питательных сред и т. п. должны быть соответствующим образом оборудованы.

При работе в бактериологической лаборатории, особенно с патогенными микроорганизмами, необходимо соблюдение следующих правил.
1. Все лица, находящиеся в бактериологической лаборатории, должны быть в халатах.

2. В помещении запрещается прием пищи и курение.

3. Каждый работник должен пользоваться только своим рабочим местом.

4. Все операции должны производиться с соблюдением правил стерильности: все посевы проводят вблизи пламени горелки, переливание зараженных жидкостей производят над лотком с дезинфицирующим раствором и т. п.

5. Весь инвентарь, находившийся в контакте с заразным материалом, подлежит стерилизации или уничтожению.

6. Все культуры, а также зараженные животные учитываются и регистрируются в журнале по специальной форме.

Бактериологическая лаборатория - научно-практическое учреждение, выполняющее микробиологические исследования. Клинико-диагностические бактериологические лаборатории при больницах в зависимости от профиля последних проводят исследования, необходимые для постановки или уточнения диагноза. Бактериологические лаборатории при санэпидемстанциях проводят профилактическое обследование населения и санитарно-бактериологическое исследование пищевых продуктов. Узко специализированы бактериологические лаборатории, выполняющие контрольные функции, например на предприятиях, выпускающих бактерийные препараты. Кроме медицинских, существуют сеть ветеринарных бактериологических лабораторий, выполняющих диагностические и профилактические исследования животных, и специализированные бактериологические лаборатории, обслуживающие нужды пищевой промышленности, сельского хозяйства и пр. Различные исследовательские задачи решают бактериологические лаборатории в соответствующих научно-исследовательских институтах.

В состав крупной бактериологической лаборатории входят: собственно лаборатория, средоварня, моечная, препараторная, стерилизационная и виварий. Помещение бактериологической лаборатории должно быть светлым и просторным. Над умывальником укрепляют бутыль с раствором для дезинфекции рук. Рабочие столы покрывают линолеумом или стеклом. На столе помещают газовую или спиртовую горелку, банку для использованных пипеток с 3% раствором карболовой кислоты, сосуд для ваты, бактериальную петлю, набор бактериальных стандартов, штативы для пробирок, кюветы, пинцеты, ножницы, скальпель, предметные и покровные стекла. Бактериологическая лаборатория должна быть снабжена баками для сброса инфицированной посуды. Обычно в бактериологической лаборатории оборудуют специальный столик для окраски препаратов.

Рис. 1. Чашки Петри.

Рис. 2. Матрац для выращивания бактерий.

Рис. 3. Пастеровские пипетки.

В бактериологической лаборатории, кроме обычной химической посуды, необходима специальная посуда: стеклянные чашки Петри (рис. 1) для выращивания бактерий на плотных средах; бактериальные матрацы (рис. 2) для получения больших количеств микробной массы; пробирки Ру с перетяжкой для выращивания бактерий на косяках картофеля; вассермановские пробирки длиной 90 мм и внутренним диам. 9 - 10 мм для постановки РСК и реакции агглютинации; преципитационные пробирки длиной 90 мм и диам. 3-5 мм; бактериальные пробирки для выращивания бактерий на жидких и плотных питательных средах; пастеровские пипетки (рис. 3); пипетки Мора для засева инфицированного жидкого материала; автоматические пипетки или пипетки с грушами, исключающие насасывание материала ртом. Посуда, используемая в бактериологической лаборатории, должна быть выщелочена в 1-2% растворе НCl и простерилизована при помощи высокой температуры. Посевы на плотных питательных средах производят при помощи стеклянных шпателей (рис. 4) и бактериальной петли (рис. 5). Выращивают бактерии в термостатах или термостатных комнатах.

Рис. 4. Стеклянные шпатели.

Рис. 5. Бактериальная петля.

Бактериологическая лаборатория, занимающаяся изучением анаэробных бактерий, должна быть снабжена анаэростатами, вакуумными насосами, которые используют также для фильтрования и ультрафильтрования. Для соблюдения стерильности при работе с бактериальными культурами бактериологические лаборатории оснащаются специальными застекленными боксами. Все питательные среды, бактериальные культуры, сыворотки хранят в холодильнике.

Каждая бактериологическая лаборатория должна иметь центрифугу, аппарат для встряхивания (рис. 6) и микроскоп. Для большинства исследований пользуются микроскопом МБИ-1 с осветителем ОИ-7 и фазово-контрастным устройством.

Рис. 6. Аппарат для встряхивания (шюттель-аппарат).

Бактериологическая лаборатория должна быть оснащена аппаратурой для стерилизации: автоклав, аппарат Коха, печь Пастера, аппарат для свертывания сыворотки. Для стерилизации жидких субстратов используют бактериальные фильтры (см.). В бактериологических лабораториях должны быть приспособления для розлива сред (рис. 7), наборы реактивов для проведения некоторых химических анализов, а также компаратор Михаэлиса или потенциометр для определения рН среды.

Рис. 7. Приспособление для розлива сред.

Работа с животными в бактериологической лаборатории проводится только в виварии (см.).

Во время работы в бактериологической лаборатории необходимо соблюдать следующие правила: 1) все находящиеся в лаборатории должны быть в халатах; 2) каждый сотрудник должен иметь рабочее место; 3) в бактериологической лаборатории запрещается принимать пищу и курить; 4) при работе с заразным материалом следует пользоваться инструментами; инструменты, находившиеся в контакте с заразным материалом, обязательно стерилизуют; 5) при отсасывании жидкого материала рекомендуется пользоваться грушами; все пипетки должны быть заткнуты ватой; 6) переливание инфицированных жидкостей производят над сосудом с дезинфицирующим раствором; 7) работу с инфицированным материалом проводят у горелки, обжигая края пробирки, петли, шпатели и т. д.; 8) посуду с инфицированным материалом обязательно надписывают с указанием названия культуры, номера и даты; 9) при попадании заразного материала на окружающие предметы проводят дезинфекцию - заливают это место дезинфицирующим раствором и прожигают тампоном с горящим спиртом; 10) инфицированные материалы, посуду регистрируют, складывают в баки и стерилизуют в тот же день; 11) культуры хранят в агаровых столбиках в запаянных пробирках с этикетками; 12) регистрация всех культур, а также зараженных животных ведется в журнале по специальной форме.

История лаборатории

Лаборатория ведет свое начало со времени основания клиники кожных болезней, когда в 1911г при клинике кожных болезней Московского Университета была организована лаборатория. Первым лаборантом лаборатории был назначен ординатор Н.А.Черногубов.

В 1930 г. лабораторию возглавил Г.В.Выгодчиков, которым в 1926 г. был основан бактериологический отдел. В 1970г. лаборатория вошла в состав Централизованной клинико-диагностической лаборатории.

В настоящее время является структурным диагностическим подразделением Лабораторно-гемотрансфузиологического Комплекса Клинического центра Первого МГМУ им. И. М. Сеченова.

Межклиническая бактериологическая лаборатория - одна из крупнейших лабораторий клинической микробиологии в г. Москве.

Руководит лабораторией - врач высшей категории, кандидат медицинских наук
Ольга Алексеевна Морозова, тел.: 8-499-245-38-71

Кадровый состав

В составе лаборатории трудятся:

• 9 врачей-бактериологов, среди них 6 высшей квалификации, 2 к.м.н.
• 11 фельдшеров-лаборантов, 5 из которых имеют высшую квалификационную категорию.

Весь врачебный и средний персонал имеет сертификаты на право медицинской деятельности по своей специальности.

Структура лаборатории

В структуре лаборатории работают следующие функциональные группы:

• Исследования микрофлоры воспалительных процессов.
• Кишечных инфекций.
• Воздушно-капельных инфекций.
• Санитарно-бактериологическая.
• Лабораторной диагностики кожно-венерологической патологии

Лаборатория выполняет микробиологические диагностические и профилактические исследования материала от стационарных и амбулаторных больных университетских больниц на Девичьем поле, Клинико-диагностического центра, межклинических подразделений. Выполняется значительный объем работ по санитарно-бактериологическому контролю в клиниках университета. Ведется договорная и коммерческая работа.

Оснащенность лаборатории.

Лаборатория оснащена современным аналитическим и общелабораторным оборудованием:

• Автоматическая система приготовления и розлива питательных сред «MasterClave 09, APC 320/90» (AES, Франция),
• Ламинарные шкафы II класса биологической безопасности NU-437 (NuAire,США),
• СО2-инкубаторы NU-5500 (NuAire, США),
• Термостаты MIR 262 (Sanyo, Япония),
• Автоклавы MLS (Sanyo, Япония),
• Стерилизаторы суховоздушные FED 115 (Binder, Германия).

Для видовой идентификации выделенных микроорганизмов и определения их чувствительности к антибактериальным препаратам используется автоматический микробиологический анализатор «WalkAway 96 Plus» (Siemens, Германия), высокоточный и высокопроизводительный MALDI-TOFмасс-спектрометр (Bruker Daltonik, Германия). Для каждого из выделенных штаммов энтеробактерий проводится тест на наличие b-лактамаз расширенного спектра действия (БЛРС). Для исследования проб крови на стерильность используется бактериологический анализатор гемокультур «Bactec 9050» (Becton Dickinson, США). Культивирование проб на наличие анаэробной инфекции осуществляется в анаэростатах с использованием специальных питательных сред импортного производства.

Все используемые методы исследования и реактивы сертифицированы.

Сбор проб клинического материала осуществляется только в стерильную одноразовую пластиковую посуду.
В лаборатории действует профессиональная сетевая программа мониторинга микробиологических исследований «Микроб-2», которая позволяет анализировать полученные результаты, определять активность антибиотиков, этиологическую структуру той или иной нозологии воспалительного характера, выявлять госпитальные штаммы.

Научная деятельность .

Специфика лаборатории клинической микробиологии выражается в значительной востребованности материалов ее работы в научных исследованиях клиницистов. В результате сотрудничества с кафедрами клиник лаборатория имеет не менее 4 публикаций в год.

Лаборатория лицензирована, участвует в Федеральной системе внешней оценки качества.
Лицензия № ФС-77-01-007170 от 16.09.2015 г.

Страница 5 из 91

Для проведения микробиологических исследований при больницах и поликлиниках или самостоятельно от них существуют бактериологические лаборатории. В них поступает для исследования различный материал, полученный от больных людей (мокрота, моча, гной, кал, кровь, спинномозговая жидкость и пр.). Кроме того, существуют еще санитарно-бактериологические лаборатории, в которых бактериологическому контролю подвергается вода, воздух и пищевые продукты.
Велика роль бактериологических лабораторий и в профилактике инфекционных заболеваний. Некоторые лица после перенесенного инфекционного заболевания (брюшной тиф, дизентерия, дифтерия и др.) продолжают выделять в окружающую среду болезнетворных (патогенных) микробов. Это так называемые бактерионосители. Среди здоровых людей также встречаются бактерионосители. Выявляя таких бактерионосителей, бактериологические лаборатории помогают органам здравоохранения в проведении ряда профилактических мероприятий.
Загрязненные патогенными микроорганизмами вода и пищевые продукты могут быть причиной возникновения эпидемий (массовых заболеваний) брюшного тифа, холеры и др., поэтому так велико значение повседневного санитарно-бактериологического контроля за доброкачественностью питьевой воды, молока и других продуктов.
Бактериологическая лаборатория должна иметь в своем распоряжении не менее трех комнат: 1) небольшую комнату - регистратуру для приема и выдачи анализов; 2) средоварочную и моечную - для приготовления питательных сред и мойки посуды; 3) лабораторию для производства бактериологических исследований. Желательно иметь и помещение для содержания подопытных животных (виварий). В каждой комнате должна стоять соответствующая мебель (кухонные и лабораторные столы, различные шкафы, табуреты и т. д.).
Ниже приводится перечень главнейших предметов, необходимых при выполнении повседневной лабораторной работы. Цель их применения, способ обращения с ними, а также принцип устройства описываются в соответствующих разделах курса.
Приборы оптические. Биологический микроскоп с иммерсионной системой, лупы, агглютиноскоп.
Приборы для стерилизации и нагревания. Автоклав, текучепаровой аппарат, сушильный шкаф, фильтры Зейтца, термостаты, стерилизаторы для инструментов.
Аппаратура для варки сред. Воронка для горячего фильтрования, воронка для разливки сред, водяная баня, кастрюли разных размеров, весы тарированные с разновесами, мясорубка, штативы металлические и деревянные для фильтрования.
Инструменты. Скальпели различной формы и ве: личины, ножницы прямые, изогнутые, тупоконечные, кишечные, пинцеты анатомические, хирургические, шприцы.
Стеклянные предметы. Стекла предметные, стекла предметные с лункой, стекла покровные, пробирки бактериологические, пробирки короткие для серологических реакций (агглютинационные), центрифужки, чашки Гейдепрейха*, стеклянные трубки и палочки, пипетки градуированные на 1, 2, 5, 10 мл, пипетки пастеровские, стеклянные флаконы для красок с пипетками, стеклянные стаканы и колбы разных размеров, цилиндры разных размеров, воронки для фильтрования и др.

*До настоящего времени среди большинства микробиологов и в учебниках чашки для получения изолированных колоний микробов именуются чашками Петри, а не чашками Гейденрейха, что не соответствует истинному положению вещей. Впервые в лабораторную практику чашки были введены русским микробиологом Гейден- рейхом.

Разные предметы. Бактерийная петля, платиновая проволока, резиновые трубки, весы ручные роговые с разновесами, штативы (деревянные, металлические) для пробирок, термометры, клетки для животных, аппараты для фиксации животных, центрифуга.
Химикалии, краски, материалы для сред и пр. Агар-агар, желатина, белая в листах, иммерсионное масло, фильтровальная бумага, вата гигроскопическая и простая, марля, этиловый спирт, анилиновые краски (фуксин, генциан и кристалвиолет, везувин, метиленовый синий, нейтральрот, сафранин и др.), краска Гимзы, кислоты (азотная, соляная, серная, карболовая, фосфорная, пикриновая, щавелевая и др.), щелочи (едкое кали, едкий натр, аммиак, сода), соли (азотнокислый калий, марганцовокислый калий, сернистокислый натрий, хлорид натрия и др.).

Лабораторный стол

Для проведения микробиологического исследования лаборанту необходимо иметь соответствующим образом оборудованное рабочее место. Лабораторный стол должен иметь определенную высоту, чтобы, сидя за ним, легко было микроскопировать (рис. 9). По возможности стол должен быть покрыт линолеумом, а каждое рабочее место -оцинкованным подносом или зеркальным стеклом. Рабочее место должно быть снабжено микроскопом, штативами для пробирок и красок, платиновой петлей и иглой для посевов, чашкой с мостиком для препаратов, промывалкой, песочными часами, предметными и покровными стеклами, пипетками, набором красок, фильтровальной бумагой, спиртовой или газовой горелкой и банкой с дезинфицирующим раствором (лизол, карболовая кислота, сулема, хлорамин или лизоформ), куда опускают для обеззараживания бывшие в употреблении предметные и покровные стекла, пипетки, стеклянные палочки и т. д. Посуда, в которой выращиваются микробы, обеззараживанию химическими веществами не подлежит. Следы дезинфицирующих веществ на такой посуде делают ее в дальнейшем непригодной для роста и размножения микроорганизмов. После использования посуду складывают в металлические бачки или ведра с крышкой, пломбируют и стерилизуют в автоклаве. Мелкий инструментарий (пинцеты, скальпели, ножницы) после его использования помещают в стерилизатор и кипятят в течение 30-60 минут или погружают в 3-5% мыльно-карболовый раствор хлорамина на 30-60 минут.

Рис. 9. Техника мнкроскопирования бактериологических объектов.

Рабочее место должно содержаться в абсолютной чистоте. Недопустимо, чтобы стол был загрязнен исследуемым заразным материалом (моча, кал, гной и т. д.). В последнем случае заразный материал со стола может попасть на другие окружающие предметы и тогда возможна внутрилабораторная инфекция. После окончания работы лаборант должен привести в порядок рабочее место, за которое он отвечает, и с целью профилактики стекло на рабочем месте протереть кусочком ваты, смоченным 5% раствором карболовой кислоты или хлорамина.

Правила работы и поведения в лаборатории

Работники лабораторий при работе с заразным материалом должны помнить о возможности заразиться самим и перенести инфекционное заболевание в семью, квартиру и т. д. Поэтому они должны быть внимательны, осторожны, опрятны и педантичны в работе.
При работе в лабораториях нужно соблюдать следующие правила:

1. Находиться в помещении лаборатории, а тем более работать в ней обязательно в халате и косынке или шапочке.
2. Без надобности не переходить из одного помещения лаборатории в другое и пользоваться только отведенным рабочим местом и оборудованием.
3. Не принимать пищу и не курить в лаборатории.
4. При работе с заразным материалом и живыми культурами пользоваться соответствующими инструментами: пинцетами, крючками, шпателями и другими предметами, подлежащими после их использования уничтожению или обезвреживанию (прожигание на пламени горелки, кипячение и пр.). Отсасывать жидкий заразный материал в пипетки не ртом, а при помощи баллонов, груш, переливать жидкость с заразным материалом из одного сосуда в другой только над каким-либо приемником (лоток, таз), в который налита дезинфицирующая жидкость (раствор карболовой кислоты, лизола). Посевы и пересевы производить, обжигая на пламени горелки пробирки, шпатели, платиновые петли, пипетки и т. д.
5. Если разобьется посуда или разольется жидкость, содержащая заразный материал или живые культуры, немедленно самым тщательным образом продезинфицировать загрязненное рабочее место, платье, руки. Все это следует проделать в присутствии или под контролем руководителя лаборатории, которому необходимо немедленно сообщить о происшедшей аварии.
6. Все использованные и ненужные предметы и материал по возможности уничтожать (лучше всего сжигать или тщательным образом обезвреживать в аппаратах для стерилизации или дезинфицирующих жидкостях).

Все предметы, подлежащие обеззараживанию, собрать внутри лаборатории в специальные приемники, баки, ведра с крышками и т. д., перенести в закрытом виде в автоклавную, где обеззаразить в тот же день. За доставкой заразного материала в автоклавную и за стерилизацией его должны следить специально выделенные ответственные работники лаборатории.

1. Соблюдать строгую чистоту и опрятность. Дезинфицировать и мыть руки как можно чаще в течение рабочего дня и после окончания работы.
2. Работники лабораторий подлежат обязательной вакцинации против основных инфекционных болезней (в первую очередь против кишечных).
3. Обязательно проводить ежедневный количественный учет всех живых культур и зараженных животных с записью в специальных журналах и книгах учета.
4. После работы весь материал и культуры, необходимые для дальнейшей работы, оставлять в запирающемся рефрижераторе или сейфе, а рабочее место приводить в полный порядок.
5. Ежедневную тщательную уборку помещения лаборатории необходимо производить влажным путем с применением дезинфицирующей жидкости.

Работа с возбудителями заразных болезней требует, чтобы помещения лаборатории размещались в отдельном здании либо были изолированы от больничных палат, пищевых блоков. Диагностические лаборатории должны иметь два входа: один – для сотрудников, другой – для доставки материала на исследование. Допускается получение материала через передаточное окно. Помещения лаборатории делят на «заразную» и «чистую» зоны и располагаются по ходу выполнения анализов.

«Чистая» зона лаборатории включает:

1. Комнату для верхней одежды.
2. Помещение для подготовительных работ (препараторская, моечная для приготовления и розлива питательных сред и др.)
3. Стерилизационная.
4. Комната с холодильником для хранения питательных сред и диагностических препаратов.
5. Комната для отдыха и приема пищи.
6. Комната для работы с документацией.
7. Подсобные помещения.
8. Туалет.

В «заразной» зоне размещают:

1.Комнату для приема и регистрации материала, поступающего на исследование.

3.Комнаты для проведения бактериологических исследований.

4.Комнаты для проведения серологических исследований.

5.Помещение для люминисцентной микроскопии.

6.Комната для проведение зооэнтомологиеских работат.

7.Термостатная комната и автоклавная.

Помещения, где проводится работа с живыми организмами, оборудуются бактерицидными лампами.

Задача медицинской микробиологической лаборатории - диагностика инфекционных болезней. Для этого проводят выделение возбудителя и определение иммунного ответа организма на внедрение микроорганизмов (серологическая диагностика). Кроме того, проводят выявление носителей патогенных (болезнетворных) микроорганизмов. Имеются лаборатории, в которых проводят вирусологические исследования. В специальных санитарно-бактериологических лабораториях проводят исследования с целью выявления степени микробного загрязнения внешней среды и различных объектов.

Лабораторная комната предназначена для проведения микробиологических исследований. Она должна быть просторной и светлой. Стены красят светлой масляной краской, пол покрывают линолеумом, лабораторные столы- пластиком или стеклом, что удобно для влажной уборки и дезинфекции. В лабораторной комнате оборудуют рабочие столы для врача и лаборанта, место для окраски препаратов, термостат, холодильник, центрифугу, микроскоп, шкафы, раковину с подводкой горячей и холодной воды, газовые горелки (при отсутствии газа работают со спиртовыми горелками).

Число лабораторных комнат определяется объемом работы лаборатории. В крупных лабораториях выделяют отдельные комнаты для работы с различными видами возбудителей.

Рабочий стол устанавливают у окна, чтобы свет падал сбоку или прямо. На столе размещают горелку, бактериологические петли, банки с дезинфицирующим раствором и ватой.

Перед началом работы на столе размещают все необходимое для проведения исследования. Горелку устанавливают на расстоянии, равном предплечью работающего, т. е. в позиции, исключающей лишние движения во время работы. Размер пламени в горелке и правильное свечение регулируют до начала работы.

В термостате при проведении обычных исследований температура должна быть 37°С. В больших лабораториях может быть оборудована специальная термальная комната. Температуру ежедневно регистрируют.

Рис. 1 Сухожаровой шкаф

В холодильнике держат некоторые питательные среды, диагностические препараты, кровь, желчь и пр.

Центрифугу используют для отделения плотных частиц от жидкости (например, эритроцитов от сыворотки).

В шкафах держат штативы, посуду, сухие питательные среды, реактивы и т. п.

Около раковины должны находиться сосуд с дезинфицирующим раствором для обработки рук и аптечка с набором предметов для оказания первой медицинской помощи.

Бокс - строго изолированное помещение для проведения микробиологической работы в условиях, требующих особой стерильности. Обеспложивание воздуха проводят с помощью бактерицидных ламп. Подача в бокс через приточно-вытяжную вентиляцию обеззараженного воздуха определенной температуры и влажности является лучшим способом обеспечения нужных условий для работы. Обычно в боксе работают два человека. Входят в бокс через предбоксник, в котором переодеваются (халат, тапочки, шапочка, маска) и переходят в бокс через вторую дверь.

В боксе не разговаривают и избегают лишних движений.

Помещение для приготовления питательных сред должно быть рядом с моечной и стерилизационной. В этой комнате должна быть раковина с подводкой горячей и холодной воды, дистиллятор, плита (газовая или электрическая), шкафы или стеллажи для хранения сухих питательных сред, химических реактивов, стерильной посуды.

Моечная – комната для мытья и обработки посуды, которая должна иметь раковину (с холодной и горячей водой) и плиту. Моечную оборудуют столами, стеллажами, снабжают приспособлениями для мытья посуды: моющими средствами, ершами, тряпками.

В стерилизационной находятся приборы для стерилизации чистой посуды, питательных сред и обеззараживания отработанного материала: автоклавы, сушильный шкаф и др.

При наличии отдельной препараторской комнаты ее используют для подготовки, упаковки посуды и другой подсобной работы.

В регистратуре или части помещения, ее заменяющей, принимают и регистрируют материал, поступающий для исследования, и выдают заключения микробиологического исследования.

Виварий – помещение для содержания экспериментальных животных, имеется только в больших лабораториях.

Введение

Подобно общей части любой другой науки, общая бактериология рассматривает не конкретные вопросы (скажем, идентификацию отдельных видов бактерий), а проблемы в це­лом; ее методология охватывает основные процедуры, которые находят широкое применение в самых разнооб­разных лабораторных исследованиях. Данное учебно-методи­че­ское пособие не нацелено на идентификацию какой-либо группы микроорганизмов. Это задача следующих изданий – по частной и санитарной микробиологии. Однако методы, приведенные в нем, могут быть полезными в любой области, где приходится иметь дело с бактериями, и могут применяться для ре­шения практических задач, включающих выделение и типизацию бактерий.

Бактериология стала наукой только после того, как были разработаны уникальные методы, благодаря кото­рым она продолжает оказывать влияние и проникать в такие появившиеся позднее области науки, как вирусо­логия, иммунология и молекулярная биология. Разрабо­танная Р. Кохом техника использования чистых культур и впервые примененные Л. Пастером иммунологические ре­акции и химический анализ и сейчас не утратили своего значения.

Методология общей бактериологии отражена в данном издании с помощью такого построения, которое типично для стандартных учебных пособий по этой дис­циплине. Однако, в отличие от лабораторных практикумов по курсу микробиологии для вузов, она по некоторым разделам изложена более детально и носит справочный характер. Данная структура учитывает особенность подготовки и специализации врачей-бактериологов и ветсанэкспертов. Часто материал излагается произвольно, поэтому некоторые методы упо­минаются несколько раз, что обусловлено стремлением продемонстрировать их взаимосвязь.

Бактериологическая лаборатория

Бактериологические лаборатории как структурные единицы организуются в составе областных, районных, межрайонных ветеринарных лабораториях, а также в структуре зональных ветеринарных лабораторий. Они также организованы при центрах санитарно-эпидемио­логиче­ского надзора, в инфекционных больницах, больницах общего типа, некоторых специализированных ста­ционарах (например, в туберкулезных, ревматологических, кожно-венерологических), и в поликлиниках. Бактериологические лаборатории входят в состав специализированных научно-исследовательских учреждений. Бактериологические лаборатории постоянно используются для подтверждения или установления оценки пригодности мяса на пищевые цели по ВСЭ.

Объектами исследования в бактериологических лабо­раториях являются:

1. Выделения из организма: моча, кал, мокрота, гной, а также кровь, патологический и трупный материал.

2. Объекты внешней среды: вода, воздух, почва, смывы с предметов инвентаря, корма, технологическое сырьё получаемое от убоя сельскохозяйственных животных.

3. Продукты питания, образцы мяса и мясопродуктов, молока и молокопродуктов, которым необходимо дать оценку на пригодность для пищевых целей.

Помещение бактериологической лаборатории и оборудование рабочего места

Специфика микробиологических работ требует, чтобы по­мещение, отведенное под лабораторию, было изолировано от жилых комнат, пищевых блоков и других непрофильных производственных помещений.

В состав бактериологической лаборатории входят: лабо­раторные комнаты для бактериологических исследований и подсобные помещения; автоклавная или стерилизационная для обеззараживания отработанного материала и зараженной посуды; моечная, оборудованная для мытья посуды; бактериологическая кухня – для приготовления, разлива, стерилизации и хра­нения питательных сред; виварий для содержания подопыт­ных животных; материальная для хранения запасных реакти­вов, посуды, аппаратуры и хозяйственного инвентаря.

Перечисленные подсобные помещения как самостоятель­ные структурные единицы входят в состав крупных бактерио­логических лабораторий. В небольших лабораториях бактериологическую кухню и стерилизационную объединяют в одной комнате; специальное помещение для содержания подопытных живот­ных отсутствует.

Помещения микробиологических лабораторий по степени опасности для персонала разделяются на 2 зоны:

I. "Заразная" зона - помещение или группа помещений лаборатории, где осуществляются манипуляции с патогенными биологическими агентами и их хранение, персонал одет в соответствующий тип защитной одежды.

II. "Чистая" зона - помещения, где не проводят работу с биологическим материалом, персонал одет в личную одежду.

Под лабораторные комнаты, в которых производят все бактериологические исследования, отводят наиболее светлые, просторные помещения. Стены в этих комнатах на высоту 170 см от пола окрашивают в светлые тона масляной краской или покрывают кафелем. Пол застилают релином или линолеумом. Такого рода отдел­ка позволяет пользоваться при уборке помещения дезинфи­цирующими растворами.

В каждой комнате должна быть раковина с водопровод­ной подводкой и полкой для бутыли с дезинфицирующим раствором.

В одной из комнат оборудуют застекленный бокс - изолированное помещение с тамбуром (предбоксником) для выполнения работ в асептических условиях. В боксе ставят стол для посевов, табурет, над рабочим местом монтируют бактерицидные лампы. В предбокснике помещают шкаф для хранения стерильного материала. Окна и двери помещений "заразной" зоны должны быть герметичными. Имеющаяся вытяжная вентиляция из "заразной" зоны должна быть изолирована от других вентиляционных систем и оборудована фильтрами тонкой очистки воздуха.

Лабораторное помещение оборудуется столами лаборатор­ного типа, шкафами и полками для хранения необходимой при работе аппаратуры, посуды, красок и реактивов.

Очень большое значение для работы имеет правильная организация рабочего места врача-бактериолога и лаборанта. Лабораторные столы устанавливают около окон. При размещении их нужно стремиться к тому, чтобы свет падал спереди или сбоку от работающего, лучше с левой стороны, но ни в коем случае не сзади. Желательно, чтобы комнаты для проведения анализов, особенно для микроскопирования, имели ориентацию окон на север или северо-запад, так как для работы необходим ровный рассеянный свет. Освещенность поверхности столов для работы должна быть 500 лк. Для удобства дезинфекции поверхность лабораторных столов покрывают пластиком или обивают железом. За каждым сотрудником лаборатории закрепляют отдельное рабочее место размером 150´60 см.

Все рабочие места оборудуют предметами, необходимыми для повседневной бактериологической работы, перечень которых дан в таблице 1.

Таблица 1.

Необходимые предметы для бактериологической работы

Наименование предмета	Примерное количество
1. Набор красок и реактивов для окраски
2. Стекла предметные	25-50
3. Стекла покровные	25-50
4. Стекла с лунками	5-10
5. Штатив под пробирки
6. Петля бактериальная
7. Шпатели стеклянные
8. Шпатели металлические
9. Банка с ватой
10. Пипетки, градуированные на 1, 2, 5, 10 мл	По 25 каждого объема
11. Пипетки пастеровские	25-50
12. Пинцет, ножницы, скальпель	По 1
13. Емкости с дезинфицирующими растворами
14. Микроскоп с осветителем
15. Лупа 5 ´
16. Масленка с иммерсионным маслом
17. Фильтровальная бумага	3-5 листов
18. Банка с дезинфицирующим раствором для пипеток
19. Спиртовая или газовая горелка
20. Установка для окраски препаратов
21. Песочные часы на 1 или 2 минуты	По 1
22. Груша с резиновой трубкой
23. Карандаш по стеклу
24. Банка со спиртовыми ватками
25. Необходимая стерильная посуда	-

Дезинфекция

Дезинфекцией является уничтожение микроорганизмов в объектах внешней среды.

В микробиологических лабораториях дезинфекционные ме­роприятия используются очень широко. Оканчивая работу с заразным материалом, сотрудники бактериологических лабо­раторий производят профилактическую дезинфекцию рук и рабочего места.

Дезинфекции подвергают отработанный патологический материал (кал, моча, мокрота, различного вида жидкость, кровь) перед выбрасыванием его в канализацию.

Загрязненные патологическим материалом или культурой микробов градуированные и пастеровские пипетки, стеклян­ные шпатели и металлические инструменты тотчас после их употребления опускают в стеклянные банки с дезинфицирую­щим раствором, находящиеся на столе у каждого рабочего места.

Обязательной дезинфекции подлежат также использован­ные в работе предметные и покровные стекла, так как даже в фиксированном и окрашенном мазке иногда сохраняются жизнеспособные микроорганизмы, которые могут явиться источником внутрилабораторного заражения. Не обрабатывает­ся дезинфицирующими средствами только та посуда, в кото­рой выращивались микроорганизмы. Ее складывают в метал­лические бачки или биксы, пломбируют и сдают на автоклавирование.

Выбор дезинфицирующего вещества, концентрация его раствора, соотношение между количеством дезинфицирующего вещества и обеззараживаемого материала, а также про­должительность срока дезинфекции устанавливаются в зави­симости от конкретных условий, учитывающих в первую оче­редь устойчивость обеззараживаемых микробов, степень пред­полагаемого загрязнения, состав и консистенцию материала, в котором они находятся.

Дезинфекция рук после работы с заразным материалом и при попадании его на кожу. По окончании работы с заразным материалом руки профилактически дезинфицируют. Ватный шарик или марлевую салфетку смачивают 1% раствором хлорамина, протирают сначала левую, затем правую кисть руки в такой последовательности: тыл кисти, ладонная поверхность, межпальцевые пространст­ва, ногтевые ложа. Таким образом, сначала обрабатывают места наименее загрязненные, затем переходят к участкам кожи, загрязненным наиболее сильно. Протирают руки в течение 2 минут двумя тампонами последовательно. При загрязнении рук культурой патогенного микроба или патологиче­ским материалом в первую очередь дезинфицируют загряз­ненные участки кожи. С этой целью их покрывают на 3-5 минут ватой, увлажненной 1% раствором хлорамина, затем вату сбрасывают в бачок или ведро с отработанным ма­териалом, а руки обрабатывают вторым тампоном так же, как и при профилактической дезинфекции. После обработки хлорамином руки моют теплой водой с мылом. При работе с бактериями, образующими споры, обработка рук производится 1% активированным хлорамином. При попадании на руки заразного материала экспозицию дезинфицирующего ве­щества увеличивают до 5 минут.

Стерилизация

Стерилизация, в отличие от дезинфекции, предусматривает уничтожение в стерилизуемом объекте всех вегетативных и споровых, патогенных и непатогенных микроорганизмов. Стерилизацию производят различными способами: паром, сухим горячим воздухом, кипячением, фильтрацией и т. д. Выбор того или иного способа стерилизации определяется качеством и свойствами микрофлоры стерилизуемого объекта.

Подготовка и стерилизация лабораторного оборудования

Перед стерилизацией лабораторную посуду моют и сушат. Пробирки, флаконы, бутыли, матрацы и колбы закрывают ватно-марлевыми пробками. Поверх пробок на каждый сосуд (кроме пробирок) надевают бумажные колпачки.

Резиновые, корковые и стеклянные пробки стерилизуют в отдельном пакете, привязанном к горлышку посуды. Чашки Петри стерилизуют завернутыми в бумагу по 1-10 штук. Пастеровские пипетки по 3-15 шт. заворачивают в оберточную бумагу. В верхнюю часть каждой пипетки вкладывают кусочек ваты, предупреждающий попадание материала в окружающую среду. При завертывании пипеток нужно соблюдать большую осторожность, чтобы не обломать запаянные концы капилляров. Во время работы пипетки из пакета вынимают за верхний конец.

В верхнюю часть градуированных пипеток, как и в пастеровские пипетки, вставляют предохранительную вату и затем заворачивают в плотную бумагу, нарезанную предварительно полосками шириной 2-2,5 см и длиной 50-70 см. Полоску кладут на стол, левый конец ее загибают и завертывают им кончик пипетки, затем, вращая пипетку, навертывают на нее ленту бумаги. Для того чтобы бумага не разворачивалась, противоположный конец ее закручивают или приклеивают. На бумаге надписывают объем завернутой пипетки. При наличии пеналов градуированные пипетки стерили­зуют в них.

Лабораторную посуду стерилизуют:

а) сухим жаром при температуре 180°С и 160°С соответственно 1 ч и 150 минут.

б) в автоклаве при давлении 1,5 атм. в течение 60 минут, для уничтожения споровой микрофлоры – 90 минут при 2 атм.

Стерилизация шприцев. Шприцы стерилизуют в разобран­ном виде: отдельно цилиндр и поршень в 2% растворе гидрокарбоната натрия 30 минут. При работе со спороносной микро­флорой стерилизацию производят в автоклаве при 132±2°С (2 атм.) в течение 20 мин, при 126±2°С (1,5 атм.) - 30 мин. Простерилизованный шприц собирают после того, как он остынет, в цилиндр вставляют поршень, надевают иглу, пред­варительно вынув из нее мандрен. Иглу, цилиндр и поршень берут пинцетом, который стерилизуют вместе со шприцем.

Стерилизация металлических инструментов. Металличе­ские инструменты (ножницы, скальпели, пинцеты и пр.) сте­рилизуют в 2% растворе гидрокарбоната натрия, который предупреждает появление ржавчины и потерю остроты. Лез­вия скальпелей и ножниц перед погружением в раствор рекомен­дуется обертывать ватой.

Стерилизация бактериальных петель. Бактериальные пет­ли, сделанные из платиновой или нихромовой проволоки, сте­рилизуют в пламени спиртовой или газовой горелки. Такой способ стерилизации получил название прокаливания или фламбирования.

Петлю в горизонтальном положении вносят в нижнюю, наиболее холодную, часть пламени горелки, чтобы не про­изошло разбрызгивания сжигаемого патогенного материала. После того как он сгорит, петлю переводят в вертикальное положение, накаливают докрасна вначале нижнюю, затем верхнюю часть проволоки и прожигают петледержатель. Про­каливание в целом занимает 5-7 с.

Подготовка к стерилизации и стерилизация бумаги, марли и ваты. Вату, марлю, фильтровальную бумагу стерилизуют в сухожаровой печи при температуре 160°С в течение часа от момента показания термометром данной температуры или в автоклаве при давлении 1 атм. в течение 30 минут.

Перед стерилизацией бумагу и марлю нарезают кусочка­ми, а вату сворачивают в виде шариков или тампонов нуж­ной величины. После этого каждый вид материала в отдель­ности по одной или несколько штук заворачивают в плотную бумагу. При разрыве пакета стерилизованный материал следует стерилизовать повторно, так как стерильность его нарушается.

Стерилизация перчаток и других резиновых изделий. Из­делия из резины (перчатки, трубки и т. д.), загрязненные ве­гетативной формой микробов, стерилизуют кипячением в 2% растворе гидрокарбоната натрия или текучим паром в те­чение 30 минут; при загрязнении спороносной микрофло­рой-в автоклаве при давлении 1,5-2 атм. в течение 30 или 20 минут. Резиновые перчатки перед стерилизацией внутри и сна­ружи пересыпают тальком для предохранения их от склеива­ния. Между перчатками прокладывают марлю. Каждую пару перчаток завертывают отдельно в марлю и в таком виде по­мещают в биксы.

Стерилизация патогенных культур микробов. Пробирки и чашки, содержащие культуры микробов, не нужные для даль­нейшей работы, складывают в металлический бак, пломбиру­ют крышку и сдают на стерилизацию. Культуры патогенных микробов, вегетативные формы, убивают в автоклаве в течение 30 минут при давле­нии 1 атм. Сдача баков для стерилизации в автоклавную производит­ся специально выделенным лицом под расписку. Режим сте­рилизации регистрируется в специальном журнале. При уничтожении культур микробов I и II групп патогенности, а также материала, зараженного или подозрительного на заражен­ность возбудителями, отнесенными к этим группам, баки с от­работанным материалом переносят на металлических под­носах с высокими бортами в присутствии сопровождающего лица, допущенного к работе с заразным материалом.

Виды стерилизации

Стерилизация кипячением. Стерилизацию кипячением про­изводят в стерилизаторе. В стерилизатор наливают дистиллированную воду, так как водопроводная образует накипь. (Стеклянные предметы погружают в холодную, металлические предметы-в горячую воду с добавлением гидрокарбоната натрия). Стерилизуемые предметы кипятят на слабом огне 30-60 минут. Началом стерилизации считается момент закипания воды в стерилизаторе. По окончании кипячения инструменты берут стерильным пинцетом, который кипятят вместе с остальными предметами.

Стерилизация сухим жаром. Стерилизация сухим жаром производится в печи Пастера. Подготовленный к стерилиза­ции материал кладут на полки так, чтобы он не соприкасался со стенками. Шкаф закрывают и после этого включают обо­грев. Продолжительность стерилизации при температуре 150°С 2 ч, при 165°С – 1 ч, при 180°С – 40 мин, при 200°С – 10-15 мин (при 170°С бумага и вата желтеют, а при более высокой температуре обугливаются). Началом стерилизации считается тот момент, когда тем­пература в печи достигнет нужной высоты. По окончании срока стерилизации печь выключают, но дверцы шкафа не открывают до полного охлаждения, так как холодный воздух, поступающий внутрь шкафа, может вызвать образование тре­щин на горячей посуде.

Стерилизация паром под давлением. Стерилизацию паром под давлением производят в автоклаве. Автоклав состоит из двух котлов, вставленных один в другой, кожуха и крышки. Наружный котел называют водопаровой камерой, внутрен­ний - стерилизационной камерой. В водопаровом котле про­исходит образование пара. Во внутренний котел помещают стерилизуемый материал. В верхней части стерилизационного котла имеются небольшие отверстия, через которые прохо­дит пар из водопаровой камеры. Крышка автоклава гермети­чески привинчивается к кожуху. Кроме перечисленных основных частей, автоклав имеет ряд деталей, регулирующих его работу: манометр, водомер­ное стекло, предохранительный клапан, выпускной, воздушный и конденсационный краны. Манометр служит для опре­деления давления, создающегося в стерилизационной камере. Нор­мальное атмосферное давление (760 мм рт. ст.) принимается за нуль, поэтому в неработающем автоклаве стрелка манометра стоит на нуле. Между показания­ми манометра и температурой имеется определенная зависи­мость (табл. 2).

Таблица 2.

Соотношения показаний манометра и температуры кипения воды

Красная черта на шкале ма­нометра определяет максималь­ное рабочее давление, которое допускается в автоклаве. Пре­дохранительный клапан служит для предохранения от чрезмерно­го повышения давления. Его уста­навливают на заданное давление, то есть, давление, при котором нуж­но производить стерилизацию, при переходе стрелки манометра за черту клапан автоклава автоматически открывается и выпускает лишний пар, замедляя тем самым дальнейший подъем давления.

На боковой стенке автоклава имеется водомерное стекло, показывающее уровень воды в водопаровом котле. На трубке водомерного стекла нанесены две горизонтальные черты - нижняя и верхняя, обозначающие соответственно допускаемый нижний и верхний уровень воды в водопаровой ка­мере. Воздушный кран предназначен для удаления воздуха из стерилизационной и водопаровой камер в начале стерилиза­ции, так как воздух, являясь плохим проводником тепла, на­рушает режим стерилизации. На дне автоклава находится конденсационный кран для освобождения стерилизационной камеры от конденсата, образующегося в период нагревания стерилизуемого материала.

Правила работы с автоклавом. Перед началом работы осматривают автоклав и контрольно-измеритель­ную аппаратуру. В автоклавах с автоматическим регулированием пара на электровакуумном манометре водопаровой камеры стрелки устанавливают в соответствии с режимом стерилизации: ниж­нюю стрелку ставят на 0,1 атм. ниже, верхнюю-на 0,1 атм. выше рабочего давления, водопаровую камеру заполняют водой до верхней отметки мерного стекла. В период заполнения водой вентиль на трубе, по которой пар поступает в камеру, держат открытым для свободного выхода воздуха из котла. Стерилизационную камеру автоклава загружают стерилизуемым материалом. После этого крышку (или дверцу) автоклава закрывают, плотно закрепляя центральным затвором или болтами; чтобы избежать перекоса, болты завинчивают крест-накрест (по диаметру). Затем включают источник подогрева (электрический ток, пар), закрывая вентиль на тру­бе, соединяющей источник пара со стерилизационной камерой. С началом парообразования и создания давления в водопаровой камере производят продувку (удаление воздуха из стерилизационного котла). Способ удаления воздуха определяется конструкцией автоклава. Вначале воздух выходит отдельными порциями, затем появляется ровная непрерывная струя пара, указывающая, что из стерилизационной камеры воздух полностью вытеснен. После удаления воздуха кран закрывают, и в стерилизационной камере начинается постепенное повышение давления.

Началом стерилизации считается тот момент, когда стрелка манометра показывает заданное давление. После этого интенсивность подогрева уменьшают, чтобы давление в автоклаве в течение нужного времени оставалось на одном уровне. По окончании времени стерилизации подогревание прекращают. Закрывают вентиль в трубопроводе, подающем пар в стерилизационную камеру, и открывают вентиль на конденсационной (нисходящей) трубе для снижения давления пара в камере. После падения стрелки манометра до нуля медлен­но ослабляют прижимные приспособления и открывают крыш­ку автоклава.

Температура и продолжительность стерилизации опреде­ляются качеством стерилизуемого материала и свойствами тех микроорганизмов, которыми он заражен.

Контроль температуры в стерилизационной камере осуще­ствляется периодически с помощью бактериологических тестов. Биотесты изготовляются бактериологическими лабораториями ЦСЭН. В случае непрохождения данных тестов производят проверку технического состояния автоклава.

Стерилизация текучим паром. Стерилизация текучим паром производится в текучепаровом аппарате Коха или в автоклаве при незавинченной крышке и открытом выпускном кране. Аппарат Коха представляет собой металлический полый цилиндр с двойным дном. Пространство между верхней и нижней пластинками дна заполняют на 2/3 водой (для спуска оставшейся после стерилизации воды есть кран). Крышка аппарата имеет в центре отверстие для термометра и несколь­ко небольших отверстий для выхода пара. Стерилизуемый материал загружают в камеру аппарата неплотно, чтобы обеспечить возможность наибольшего кон­такта его с паром. Началом стерилизации считается время с момента закипания воды и поступления пара в стерилизационную камеру. В текучепаровом аппарате стерилизуют, главным образом, питательные среды, свойства которых из­меняются при температуре выше 100°С. Стерилизацию текучим паром следует проводить повтор­но, так как однократное прогревание при температуре 100°С не обеспечивает полного обеззараживания. Такой метод полу­чил название дробной стерилизации: обработку сте­рилизуемого материала текучим паром проводят по 30 минут ежедневно в течение 3 дней. В промежутках между стери­лизациями материал выдерживают при комнатной темпера­туре для прорастания спор в вегетативные формы, которые погибают при последующих прогреваниях.

Тиндализация. Тиндализация-дробная стерилизация с применением температуры ниже 100°С, предложенная Тиндалем. Прогревание стерилизуемoгo материала производят в водяной бане, снабженной терморегулятором, по часу при температуре 60-65°С в течение 5 дней или при 70- 80°C в течение 3 дней. В промежутках между прогреваниями обрабатывае­мый материал выдерживают при температуре 25°С для прорастания спор в вегетативные формы, которые погибают при последующих прогрева­ниях. Тиндализацией пользуются для обеспложивания питательных сред, содержащих белок.

Механическая стерилизация с помощью бактериальных ультрафильтров . Бактериальные фильтры применяют для освобождения жидкости от находящихся в ней бактерий, а также для отделения бактерий от вирусов, фагов и экзоток­синов. Вирусы бактериальными фильтрами не задерживаются, и поэтому ультрафильтрацию нельзя рассматривать как сте­рилизацию в принятом значении этого слова. Для изготовления ультрафильтров применяют мелкопористые материалы (каолин, асбест, нитроцеллюлоза и др.), спо­собные задерживать бактерии.

Асбестовые фильтры (фильтры Зейтца) представляют собой асбестовые пластинки толщиной 3-5 мм и диаметром 35 и 140 мм для фильтрации малых и больших объемов жидкости. В нашей стране асбестовые фильтры, изготовляют двух марок: «Ф» (фильтрующие), за­держивающие взвешенные частицы, но пропускающие бакте­рии, и «СФ» (стерилизующие), более плотные, задерживаю­щие бактерии. Перед употреблением асбестовые фильтры монтируют в фильтровальные аппараты и вместе с ними стерилизуют в ав­токлаве. Асбестовые фильтры используются однократно. Мембранные ультрафильтры изготавливаются из нитроцеллюлозы и представляют собой диски белого цвета диаметром 35 мм и толщиной 0,1 мм.

Бактериальные фильтры разли­чаются по величине пор и обозна­чаются порядковыми номерами (табл. 3).

Таблица 3.

Бактериальные фильтры

Непосредственно перед употреб­лением мембранные фильтры сте­рилизуют кипячением. Фильтры по­мещают в дистиллированную воду, подогретую до температуры 50- 60°С, чтобы предупредить их скру­чивание, кипятят на слабом огне в течение 30 минут, меняя 2-3 раза воду. Простерилизованные фильтры во избежание их повреждения вы­нимают из стерилизатора фламбированным и остуженным пинцетом с гладкими кончиками.

Для фильтрации жидкостей бактериальные фильтры монтируют в специальные фильтро­вальные приборы, в частности, в фильтр Зейтца.

Он состоит из 2-х частей: верхней, имеющей форму цилиндра или воронки, и нижней-опорной части аппарата, с так называемым фильтровальным столиком из металлической сетки или чистой керамической пластинки, на которую помещают мембранный или асбестовый фильтр. Опорная часть аппарата имеет форму воронки, суживающаяся часть которой находится в резиновой пробке горлышка колбы Бунзена. В рабочем состоянии верхнюю часть прибора фиксируют на нижней с помощью винтов. Перед началом фильтрации места соединения различных частей установки для создания герметичности заливают парафином. Отводную трубку колбы присоединяют толстостенной ре­зиновой трубкой к водоструйному, масляному или велосипедному нacocy. После этого в цилиндр или воронку аппарата наливают фильтруемую жидкость и включают насос, создающий вакуум в приемном сосуде. В результате образующейся разности давлений фильтруемая жидкость проходит через поры фильтра в приемник. Микроорганизмы остаются на поверхности фильтра.

Приготовление мазков

Для изучения микроорганизмов в окрашенном виде на предметном стекле делают мазок, высушивают, фиксируют его и после этого окрашивают.

Исследуемый материал распределя­ют тонким слоем по поверхности хорошо обез­жиренного предметного стекла.

Мазки готовят из культур микробов, патологического ма­териала (мокрота, гной, моча, кровь и др.) и из органов трупов.

Техника приготовления мазков определяется характером исследуемого материала.

Приготовление мазков из микробных культур с жидкой питательной средой и из жид­кого патологического материала (моча, ликвор и др.). Маленькую каплю исследуемой жидкости на­носят бактериальной петлей на предметное стекло и круго­выми движениями петли распределяют равномерным слоем в виде кружка диаметром в копеечную монету.

Приготовление мазков из крови. На пред­метное стекло, ближе к одному из его концов, наносят кап­лю крови. Второе - шлифованное - стекло, которое должно быть уже предметного, ставят на первое под углом 45° и подводят к капле крови до соприкосновения с ней. После того как кровь растечется по шлифованному краю, стеклом делают скользящее движение справа налево, равномерно рас­пределяя кровь тонким слоем по всей поверхности стекла. Толщина мазка зависит от величины угла между стеклами: чем острее угол, тем тоньше мазок. Правильно приготовленный мазок имеет светло-розовую окраску и оди­наковую толщину на всем протяжении.

Приготовление толстой капли. На середину предметного стекла пастеровской пипеткой наносят каплю крови или прикладывают стекло непосредственно к выступающей капле крови. Нанесенную на стекло кровь размазывают бактериальной петлей так, чтобы диаметр об­разующегося мазка соответствовал величине копеечной мо­неты. Стекло оставляют в горизонтальном положении до высыхания крови. Кровь в «толстой капле» распределяется неравномерно, образуя неровный край.

Приготовление мазка из вязкого мате­риала (мокрота, гной). Мокроту или гной, нанесенные на предметное стекло ближе к узкому краю, накрывают другим предметным стеклом. Стекла слегка придавливают друг другу.

После этого свободные концы стекол захватывают 1 и 2 пальцами обеих рук и разводят в противоположные стороны так, чтобы при движении оба стекла плотно прилегали друг к другу. Получаются мазки с равномерно распределенным материалом, занимающим большую площадь.

Приготовление мазка из культур с плотных питательных сред. На середину чистого, хорошо обезжиренного предметного стекла наносят каплю воды, в нее вносят бактериальную петлю с небольшим количеством исследуемой микробной культуры, так, чтобы капля жидко­сти стала слегка мутноватой. После этого излишек микроб­ного материала на петле сжигают в пламени и при­ступают к приготовлению мазка по вышеописанному способу.

Приготовление мазков из органов и тканей. Поверхность органа с целью обеззараживания прижигают накаленными браншами пинцета, делают по этому ме­сту надрез и из глубины остроконечными ножницами вырезают небольшой кусочек ткани, который помещают между двумя предметными стеклами. Далее поступают так же, как при приготовлении мазка из гноя и мокроты. Если ткань органа плотная, то из глубины разреза делают скальпелем соскоб. Полученный при соскабливании материал распределя­ют тонким слоем по поверхности стекла скальпелем или бактериальной петлей.

Для изучения взаимного расположения элементов ткани и находящихся в ней микроорганизмов делают мазки-отпе­чатки. Для этого вырезанный из середины органа небольшой кусочек ткани захватывают пинцетом и прикладывают по­следовательно несколько раз по­верхностью среза к предметному стеклу, получая, таким образом, ряд мазков-отпе­чатков.

Высушивание и фиксация мазков. Приготовленный на предметном стекле мазок высушивают на воздухе и после полного высыхания фиксируют. При фиксировании мазок закрепляется на поверхности предметного стекла, и поэтому при последующей окраске препарата микробные клетки не смываются. Кроме того, убитые микробные клетки окрашиваются лучше, чем живые.

Различают физический способ фиксации, в основу которого положено воздействие высокой температуры на микробную клетку, и химические способы, предусматривающие применение средств, вызывающих коагуляцию белков. Нельзя фиксировать над пламенем мазки, содержащие возбудителей I – II групп патогенности.

Физический способ фиксации. Предметное стекло с препаратом берут пинцетом или I и II пальцами правой руки за ребра мазком кверху и плавным движением проводят 2-3 раза над верхней частью пламени горелки. Весь процесс фиксации должен занимать не более 2 с. Надежность фиксации проверяют следующим простым приемом: свободную от мазка поверхность предметного стекла прикла­дывают к тыльной поверхности левой кисти. При правиль­ном фиксировании мазка стекло должно быть горячим, но не вызывать ощущения ожога.

Химический способ фиксации. Для фиксации мазков применяют также химические вещества и соединения, приведенные в таблице 4.

Таблица 4.

Вещества для химической фиксации

Предметное стекло с высушенным мазком погружают в склянку с фиксирующим веществом и затем высушивают на воздухе.

Окраска мазков

Техника окраски мазков. Для окраски мазков пользуются растворами красок или красящей бумагой, что предложено А.И. Синевым. Простота приготовления, удобство применения, а также возможность хранения красящей бумаги в течение неограниченно долгого времени явились основанием для широкого их использования при различных способах окраски.

Окраска мазков красящей бумагой. На высу­шенный и фиксированный препарат наносят несколько ка­пель воды, кладут окрашенные бумажки величиной 2´2 см. В течение всего времени окрашивания бумага должна оставаться влажной и плотно прилегать к поверхности стекла. При подсыхании бумагу дополнительно смачивают водой. Продолжительность окрашивания мазка определяется мето­дом окраски. По окончании окраски бумагу осторожно сни­мают пинцетом, а мазок промывают водопроводной водой и подсушивают на воздухе или фильтровальной бумагой.

Окраска мазков растворами красителей. На высушенный и фиксированный препарат пипеткой наносят краситель в таком количестве, чтобы он покрывал весь ма­зок. При окраске мазков концентрированными растворами красителей (карболовый фуксин Циля, карболовый генциановый или кристаллический фиолетовый) окрашивание произ­водят через фильтровальную бумагу, задерживающую части­цы красителя: на фиксированный мазок кладут полоску фильтровальной бумаги и на нее наливают раствор краси­теля.

Для микроскопического исследования приготовленные мазки, высу­шенные и зафиксированные, подвергают окраске. Окраска бывает простая и сложная. Простая окраска заключается в нанесении на мазок какой-либо одной краски на определенный промежуток времени. Чаще всего для про­стой окраски применяют спирто-водный (1:10) фуксин Пфейффера, леффлеровскую метиленовую синьку и сафранин. Эозин, как кислая краска, упо­требляется только для окраски цитоплазмы клеток и подкраски фона. Кислый фуксин совершенно непригоден для окраски бактерий.