Активности панкреатической липазы

Клинико-диагностическое значение определения

Повышение активности панкреатической липазы в сыворотке крови отмечено при панкреатите любого происхождения, в особенности- остром панкреатите, при котором активность фермента повышается также и в асцитической жидкости. У больных панкреатитом целесообразно одновременно исследовать активность липазы в крови и моче, поскольку в последней она оказывается повышенной чаще, чем в крови. Лекарственные препараты, провоцирующие спазм сфинктера Одди (наркотические средства, анальгетики, секретин), гепарин (стимулирующий высвобождение липазы) активируют этот фермент.

Низкие показатели активности липазы обнаружены у больных туберкулезом, сифилисом, раком, при различных инфекционных заболеваниях, причем по мере прогрессирования патологического процесса активность фермента все более снижается.

Белки – высокомолекулярные азотсодержащие вещества. Различают простые белки – протеины, состоящие из 20 различных аминокислот, и сложные белки – протеиды, состоящие из протеина и простетического (небелкового) компонента. К простетическим компонентам относятся нуклеиновые кислоты, гем, липиды, фосфорная кислота и др. К сложным белкам относятся нуклеопротеиды, хромопротеиды, липопротеиды, фосфопротеиды.

Биохимический анализ обычно начинается с определения содержания общего белка в плазме (сыворотке) крови .

Изменения уровня общего белка могут быть как абсолютными, так и относительными. Последние обычно наблюдаются при увеличении (уменьшении) объема крови (плазмы). Так, гидремия приводит к относительной гипопротеинемии, а дегидратация - к относительной гиперпротеинемии. В связи с этим, при трактовке показателей общего белка в сыворотке (плазме) крови следует обязательно учитывать нарушения водного обмена.

Дегидратация может скрыть абсолютную гипопротеинемию, поскольку при данном сочетании концентрация белка в плазме крови не всегда отличается от нормы. Отсюда следует, что причиной гипо- и гиперпротеинемии может быть не только нарушение равновесия между поступлением, биосинтезом белка, его катаболизмом и удалением, но и изменение объема внутрисосудистого пространства за счет жидкой (водной) части крови. Понятно, что патогенез этих изменений различен.

Для дифференциации абсолютных и относительных изменений содержания белка в плазме достаточно исследовать показатель гематокрита или определить объем плазмы (крови).

При подавляющем большинстве хронических заболеваний внутренних органов, сопровождающихся сдвигами в белковом обмене, обнаруживается гипопротеинемия, носящая обычно вторичный характер.

Абсолютная гипопротеинемия выявляется при патофизиологических синдромах, выражающихся в снижении биосинтеза, усилении катаболизма, аномальных потерях, патологическом распределении белка между отдельными секторами организма. Причинами абсолютной гипопротеинемии являются:

1. Недостаточное поступление белка с пищей вследствие голодания, недоедания, сужения (стриктуры) пищевода (из-за ожога, опухоли), нарушения целостности и функции желудочно-кишечного тракта, при продолжительных воспалительных процессах в стенке кишечника и других состояниях, сопровождающихся ухудшением переваривания и всасывания белков.Снижение уровня общего белка в плазме (или тенденция к развитию гипопротеинемии) отмечается также при синдроме нарушенного всасывания белковой пищи и несбалансированности ее аминокислотного состава.

2. Подавление протеосинтетической функции печени, наблюдаемое при паренхиматозных гепатитах, циррозах печени, а также интоксикациях, обусловленных длительными нагноительными процессами, злокачественными новообразованиями, тиреотоксикозом, токсическим действием некоторых химических веществ.

3. Повышенный распад белков в организме, вызванный потребностью в возмещении больших энергетических затрат, связан с дефицитом пластических ресурсов. Отмечается при термических ожогах и ожоговой болезни, злокачественных новообразованиях.

4. Потеря белка организмом: с кровью при острых и хронических кровотечениях, с мочой при нефротическом синдроме (нефрозе, амилоидозе почек).

5. Перемещение в другие ткани при резко увеличенной проницаемости капиллярной стенки: образование обширных отеков, переход в третье пространство - при образовании экссудатов, выпотов в серозные полости, в просвет кишечника (при завороте кишок, перитоните).

6. Дефектопротеинемии, т.е. сравнительно редко встречающиеся наследственно обусловленные (генетически детерминированные) нарушения в синтезе белков крови.

7. Особенности физиологического состояния организма. Пониженное содержание белка в плазме крови отмечено и при некоторых физиологических состояниях: например, у женщин в последние месяцы беременности и в период лактации.

Относительные гипопротеинемии. Известно, что обильные перфузии раствора глюкозы и других физиологических жидкостей, приводят к уменьшению концентрации белка вследствие увеличения объема жидкой части крови.

Более половины всего количества белков плазмы (35-55г/л) приходится на долю альбумина. Альбумин плазмы быстро обновляется: в течение суток синтезируется и распадается 10-16г этого белка. Благодаря значительной концентрации, высокой гидрофильности и небольшим размерам молекул альбумин выполняет важную функцию по поддержанию коллоидоосмотического давления крови. Тем самым он участвует в обмене воды между кровью и межтканевым пространством. При содержании альбумина ниже 30г/л онкотическое давление уменьшается настолько, что вода переходит из внутри - во внесосудистый сектор.

Определение уровня альбумина в плазме играет существенную роль для оценки тяжести течения заболеваний, сопровождающихся гипоальбуминемией.

Столь же важное диагностическое значение имеет определение концентрации альбумина в моче.

Снижение уровня альбумина отмечается при хронических заболеваниях почек – нефротическом синдроме, а также при ожогах, кровопотерях, инфекционных болезнях, гнойных процессах, неспецифической пневмонии, туберкулезе легких и других органов, остром полиартрите и иных воспалительных состояниях, при злокачественных опухолях (раковая кахексия), лейкемии, анемии, сердечной недостаточности, инфаркте миокарда, массивной потере белка через кишечник.

Появление белка в моче (протеинурия) отмечается при ряде заболеваний почек. Принято выделять органические (вызванные поражением паренхимы почек – заболевания воспалительного характера, нефротический синдром, иногда врожденные дефекты нефрона) и функциональные почечные протеинурии, связанные с увеличением проницаемости почечного фильтра или замедлением тока крови в клубочках (под влиянием переохлаждения, физического и психического перенапряжения).

Преренальная протеинурия связана с усиленным распадом белков тканей, выраженным гемолизом; ренальная - обусловлена патологией почек (клубочковой и канальцевой); постренальная - вызвана патологией мочевыводящих путей и чаще всего – воспалительной экссудацией.

Принято дифференцировать три степени выраженности протеинурии : умеренную – при суточной потере белка до 1г, среднюю – от 1 до 3 г и выраженную – более 3г/сутки.

Основными причинами протеинурии являются:

1. повышение проницаемости гломерулярного фильтра для белков плазмы (гломерулярная протеинурия);

2. нарушение канальцевой реабсорбции профильтрованных белков (тубулярная протеинурия);

3. парапротеинемия и/или увеличение содержания белков в крови;

4. изменение почечной гемодинамики;

При обследовании больных с нарушениями белкового обмена диагностическое значение имеет определение общего белка, альбуминов и белковых фракций. В клинической практике в качестве единого метода определения общего белка принят колориметрический биуретовый метод. Достоинством метода является возможность его использования как при работе в неавтоматизированных лабораториях с отечественными реактивами и реактивами фирмы «Лахема», так и при работе на …

Принцип метода Белки сыворотки (плазмы) крови, реагируя в щелочной среде с сернокислой медью, образуют соединения, окрашенные в фиолетовый цвет. Эта специфическая биуретовая реакция, характерная для пептидов и белков, применима для фотометрического определения. В сыворотке здоровых людей содержится 65—78 г/л общего белка, у детей до 6 лет 5,6—8,5 г/л, у новорожденных 5,3—8,9 г/л, в моче — …

Небходимые реактивы: натрия хлорид, 154 ммоль/л (изотонический раствор): 9 г хлорида натрия помещают в мерную колбу вместимостью 1 л, растворяют в воде и доводят до метки водой; натр едкий, 0,2 моль/л: 8 г едкого натра помещают в мерную колбу вместимостью 1 л, осторожно растворяют в воде и доводят до метки водой; калия йодид, 30 ммоль/л …

Опытная проба: к 0,1 мл сыворотки прибавляют 5 мл рабочего раствора биуретового реактива и смешивают, избегая образования пены. Через 30 мин (и не позднее чем через 1 ч) измеряют на фотометре в кювете с толщиной слоя 1 см при длине волны 500—560 нм (зеленый светофильтр) против холостой пробы. Холостая проба: к 5 мл рабочего биуретового …

Результаты определения общего белка сыворотки крови могут быть ложно завышены при наличии липидемии, желтухи, гемолиза. Продолжительное наложение жгута повышает концентрацию всех белков в пробе. Пробы, полученные выше места внутривенной инфузии, могут дать ошибочно заниженные результаты из-за локальной гемодилюции. Увеличение содержания белка более 90 г/л имеет место при гипериммуноглобулинемии, поликлональных или моноклональных гаммопатиях. Снижение содержания белка …

При изучении белкового спектра крови в качестве унифицированного метода используется зональный электрофорез с поддерживающей средой-носителем. Под влиянием постоянного электрического поля белки сыворотки, имеющие отрицательный заряд, движутся по смоченной буферным раствором бумаге по направлению к положительному электроду со скоростью, зависящей от величины заряда и молекулярной массы частиц. Вследствие этого белки сыворотки крови разделяются на пять фракций: …

Необходимые реактивы: буфер, можно использовать различные виды буферов — мединал-вероналовый, боратный, трис-буфер: мединал-вероналовый буфер рН 8,6: 10,3 г мединала и 1,84 г веронала растворяют и доводят до 1 л водой; трис-буфер рН 8,9: трис-(оксиметил)-аминометан — 60,5 г, этилендиаминтетрауксусная кислота (ЭДТА) — 6 г, борная кислота — 4,6 г, вода — до 1 л. раствор …

Альбумин является основным онкотическим компонентом плазмы, служит в ней основным резервом азота, его роль в транспорте билирубина, желчных кислот, ионов металлов, лекарств существенно зависит от концентрации. Абсолютной гиперальбуминемии не существует. Любое состояние, связанное с потерей воды, повышает концентрацию всех белков плазмы, включая альбумин, вызывая относительную гиперальбуминемию. Снижение содержания альбумина встречается при многих заболеваниях: остром и …

Тимоловая проба относится к коллоидно-осадочным, или флокуляционным, реакциям белков плазмы. Флокуляция (осаждение) белков обычно наступает при изменении их заряда, снижении количества воды в сольватной оболочке, при увеличении размеров коллоидных частиц. Принцип метода Тимоловая проба основана на помутнении смеси при взаимодействии сыворотки с насыщенным раствором тимола в вероналовом буфере. При взаимодействии тимоло-вероналового буфера с крупнодисперсными белками …

Азотистый обмен включает реакции синтеза и распада белков, нуклеиновых кислот, аминокислот, нуклеотидов, а также ряда других азотсодержащих соединений. Для оценки состояния азотистого обмена определяют фракции остаточного азота в сыворотке или в цельной крови. Остаточный азот — это небелковый азот или азот, который остается в центрифугате (фильтрате) сыворотки крови или другой биожидкости после осаждения белков трихлоруксусной, …

Гипоаллергенная диета

8. Общий осмотр больного, правила и техника. Оценка сознания, положения больного. Оценка телосложения.

9. Осмотр головы, лица, глаз, век, носа, полости рта, шеи.

10. Осмотр кожи больного (окраска, эластичность, влажность, высыпания, рубцы) Осмотр кожи.Обращают внимание на окраску, эластичность, влажность кожи, различные высыпания и рубцы.

11. Осмотр и пальпация лимфатических узлов, мышечной системы, суставов, конечностей.

12. Осмотр грудной клетки. Признаки, определяющие форму грудной клетки. Физиологические и патологические формы грудной клетки.

14. Определение типа дыхания, симметричности, частоты, глубины дыхания, дыхательной экскурсии грудной клетки.

15. Пальпация грудной клетки. Определение болезненности, эластичности грудной клетки. Определение голосового дрожания, причины его усиления или ослабления.

16. Перкуссия легких. Физическое обоснование метода. Способы перкуссии. Виды перкуторного звука.

17. Определение пространства Траубе, его диагностическое значение.

18. Сравнительная перкуссия легких. Распределение звучности перкуторного тона в различных местах грудной клетки в норме. Патологические изменения перкуторного звука.

19. Топографическая перкуссия легких. Определение верхних и нижних границ легких, их расположение в норме. Определение экскурсии нижнего края легких.

20. Аускультация легких, основные правила. Основные дыхательные шумы. Изменения везикулярного дыхания, (ослабление и усиление, саккадированное, жесткое дыхание).

21. Патологическое бронхиальное дыхание, причины его появления и диагностическое значение. Бронховезикулярное дыхание, механизм его возникновения.

22. Побочные дыхательные шумы, механизм их возникновения, диагностическое значение.

23. Бронхофония, методика определения, диагностическое значение

25. Плевральная пункция, ее методика проведения, показания и противопоказания. Исследование плеврального выпота, его виды. Трактовка анализов.

26. Основные методы оценки функционального состояния органов дыхания (спирография, пневмотахометрия, пневмотахография, определение Ра о2 и РаСо2 в артериальной крови).

27. Спирография, основные легочные объемы. Пневмотахометрия, пневмотахография.

28 Бронхоскопия, показания, противопоказания, диагностическое значение

29. Методы функциональной диагностики рестриктивного типа нарушения вентиляции.

30. Методы диагностики бронхообструктивного синдрома.

31. Осмотр сердечного больного. Внешний вид больных с сердечной недостаточностью. Объективные признаки, обусловленные застоем крови в малом и большом кругах кровообращения.

32. Осмотр сосудов шеи. Диагностическое значение "пляски каротид", набухания и пульсации вен (отрицательного и положительного венного пульса). Визуальное определение цвд.

33. Осмотр области сердца (сердечный и верхушечный толчок, сердечный горб, эпигастральная пульсация).

34. Пальпация области сердца. Верхушечный, сердечный толчок, эпигастральная пульсация, систолическое и диастолическое дрожание, пальпация магистральных сосудов. Диагностическое значение.

2. Период изгнания крови (0,25 с)

III. Диастола желудочков (0,37 с)

2. Период изометрического (изоволюметрического) расслабления (0,08 с)

3. Период наполнения желудочков (0,25 с)

Проекции и точки аускультации клапанов сердца.

Правила аускультации сердца:

37. Шумы сердца, механизм их возникновения. Органические и функциональные шумы, их диагностическое значение. Аускультация шумов сердца.

Общие закономерности:

38. Аускультация артерий и вен. Шум волчка на яремных венах. Двойной тон Траубе. Патологический шум Дюрозье.

52. Поверхностная пальпация живота, методика, диагностическое значение.

53. Метод глубокой скользящей пальпации живота. Диагностическое значение.

54. Синдром “острого” живота

56. Методы выявления Helicobakter pylori. Расспрос и осмотр больных при заболеваниях кишечника.

57. Общие представления о методах исследования всасывания жиров, белков и углеводов в кишечнике, синдромы нарушения пищеварения и всасывания.

58. Копрологическое исследование, диагностическое значение, основные копрологические синдромы.

60. Перкуссия и пальпация печени, определение ее размеров. Семиологическое значение изменений края, поверхности консистенции печени.

61. Перкуссия и пальпация селезенки, диагностическое значение.

62. Лабораторные синдромы при заболеваниях печени (синдромы цитолиза, холестаза, гиперспленизма).

63. Иммунологические методы исследования при патологии печени, понятие о маркерах вирусных гепатитов

64. Ультразвуковое исследование печени, селезенки. Диагностическое значение.

65. Радиоизотопные методы исследования функции и структуры печени.

66. Исследование выделительной и обезвреживающей функций печени.

67. Исследование пигментного обмена в печени, диагностическое значение.

68. Методы исследования белкового обмена в печени, диагностическое значение.

69. Подготовка больных к рентгенологическому исследованию желудка, кишечника, желчевыводящих путей.

70. Методы исследования при заболеваниях желчного пузыря, пальпация пузырной области, оценка полученных результатов. Выявление пузырных симптомов.

71. Ультразвуковой исследование желчного пузыря, общего желчного протока.

72. Дуоденальное зондирование. Трактовка результатов исследования. (вариант 1).

72. Дуоденальное зондирование. Трактовка результатов исследования. (вариант 2.Учебник).

73. Рентгенологическое исследование желчного пузыря (холецистография, в/в холеграфия, холангиография, понятие о ретроградной холангиографии).

74. Методы исследования поджелудочной железы (расспрос, осмотр, пальпация и перкуссия живота, лабораторные и инструментальные методы исследования).

75. Общие представления об эндоскопических, рентгенологических, ультразвуковых методах исследования желудочно-кишечного тракта.(тупой вопрос – тупой ответ).

89. Методы диагностики сахарного диабета (расспрос, осмотр, лабораторные и инструментальные методы исследования).

90. Определение содержания глюкозы в крови, в моче, ацетона в моче. Гликемическая кривая или сахарный профиль.

91.Диабетическая кома (кетоацидотическая), симптоматика и неотложная помощь.

92. Признаки гипогликемии и первая помощь при гипогликемических состояниях.

93. Клинические признаки острой надпочечниковой недостаточности. Принципы неотложной помощи.

94.Правила забора биологических материалов (мочи, кала, мокроты) для проведения лабораторных исследований.

1.Исследование мочи

2.Исследование мокроты

3.Исследование кала

95. Техника забора крови для лабораторных исследований.

96. Методы обследования больных с патологией органов кроветворения (расспрос, осмотр, пальпация, перкуссия, лабораторные и инструментальные методы исследования).

1.Расспрос, жалобы больного:

2.Осмотр:

В.Увеличение лимфатических узлов

Г.Увеличение печени и селезёнки

3.Пальпация:

4.Перкуссия:

5.Лабораторные методы исследования (см. Вопросы № 97- 107)

6.Инструментальные методы исследования:

97. Методики определения Hb, подсчета эритроцитов, времени свертывания, времени кровотечения.

98. Подсчет лейкоцитов и лейкоцитарной формулы.

99. Методика определения группы крови, понятие о резус-факторе.

I группы.

II (а) группы.

III (в) группы.

100.Диагностическое значение клинического исследования общего анализа крови

127. Отек легких, клиническая картина, неотложная помощь.

128. Неотложная помощь при желчной колике.

129. Неотложная помощь при острой задержке мочи, катетеризация мочевого пузыря.

130. Неотложная помощь при острой почечной колике

131. Искусственная вентиляция легких и непрямой массаж сердца.

132. Внезапная смерть и реанимационные мероприятия.

133.Техника подкожных, внутрикожных инъекций. Осложнения, тактика медсестры при них.

134.Техника внутримышечных инъекций. Осложнения, тактика медсестры при них.

135.Техника внутривенных инъекций. Осложнения, тактика медсестры при них.

136.Разведение антибиотиков, техника набора лекарственного раствора из ампулы и флакона.

137.Техника сбора и подключения системы для переливания крови, кровезаменителей и лекарственных препаратов.

138.Показания и техника наложения жгутов на конечности.

68. Методы исследования белкового обмена в печени, диагностическое значение.

Роль печени в белковом обмене очень велика: в ней синтезируются и депонируются белки, в нее поступают с кровью аминокислоты, полипепти­ды пищи и продукты распада тканевых белков.

Здесь происходят их катаболизм, обезвреживание и удаление неиспользуемых продуктов распада. Часть аминокислот подвергается дезаминированию и переаминированию. Освобождающийся аммиак превращается печенью в менее токсичную мочевину. Из аминокислот, как принесенных извне, так и синтезированных пече­нью, она снова строит белки собственной ткани, а также белки крови; альбумин, глобулины (а и р, в какой-то мере и у), фибриноген, протромбин, гепарин, некоторые ферменты. В печени же образуются соединения белков с липидами (липопротеины) и углеводами (гликопротеины).

Нарушение белковообразовательной функции печени выявляют, исследуя белки кровяной плазмы или сыворотки. Это нарушение сказывается не столько на общем количестве белков, сколько на соотношении их фракций, изменение которого - диспротеинемия - наблюдает­ся при большинстве поражений печени.

Метод электрофореза на бумаге , наиболее широко используемый в настоящее время в клинической практике, основан на том, что в электрическом поле различные белки в зависи­мости от величины, формы молекулы, ее заряда и других факторов с разной скоростью дви­жутся по направлению к положительному электроду. При электрофорезе на бумаге различ­ные фракции белков концентрируются на разных участках бумажной полосы, где их можно выявить соответствующей окраской. Величину фракций определяют по интенсивности окраски каждой из них. Белки плазмы крови разделяются на пять основных фракций - аль­бумины; ш, а2-, р-, а также у-глобулины. Электрофорез в других средах (агаровый, крахмальный гель и др.) позволяет разделить белки на большее число фракций.

При заболеваниях печени наиболее часто встречается уменьшение альбумин-глобулинового коэффициента (А/Г), главным образом за счет снижения содержания альбуминов (нару­шение их синтеза). При остром воспалении печени (острый гепатит) наблюдается увеличе­ние содержания в плазме крови а 2 -глобулинов, при хроническом - преимущественно у-глобулинов, возможно, за счет накопления антител, движущихся при электрофорезе с у-глобулинами; при этом общее количество белка сыворотки нередко также увеличивается. При циррозе печени общее содержание белка сыворотки значительно падает преимущественно за счет альбуминов; однако заметно нарастает содержание у-глобулинов.

Фибриноген при электрофорезе на бумаге мигрирует с у-глобулинами и отдельно не выяв­ляется. Для количественного определения фибриноген осаждают из плазмы путем прибавле­ния хлорида кальция с последующим взвешиванием промытого и высушенного осадка или определением белка в этом осадке после его растворения. Фибриноген синтезируется в пече­ни, поэтому при тяжелом ее поражении количество фибриногена в плазме снижается, что мо­жет отразиться и на свертышании крови. Нормальное его содержание 2-4 г/л, или 8-14 мг/мл (200-400 мг% - масса сгустка; метод Рутберга).

Общее количество белка плазмы определяют чаще всего рефрактометрическим методом, а при отсутствии рефрактометра - химическими методами: Кьельдаля, биуретовой реакцией, а также нефелометрическим и др.

Белковые осадочные пробы . Соотношение белковых фракций, помимо электрофореза, определяют путем иммуноэлектрофореза, ультрацентрифугирования и др. Помимо непосред­ственного определения соотношения белковых фракций, применяется ряд простых проб, с помощью которых выявляют наличие диспротеинемии. Это так нашваемые белковые оса­дочные (флоккуляционные) пробы. Сущность их состоит в том, что при диспротеинемии, особенно при уменьшении содержания альбуминов, нарушается устойчивость коллоидной системы крови. Это нарушение выявляется при добавлении к сыворотке электролита в такой концентрации, которая не изменяет нормальную сыворотку, но при диспротеинемии вызыва­ет помутнение или выпадение хлопьев - флоккуляцию белка. То же наблюдается при появ­лении в крови патологических белков - парапротеинов. К этой группе проб относятся про­бы с сулемой (реакция Таката-Ара, сулемовые пробы Гринстеда и Гросса),сульфатом цин­ка, сульфатом кадмия, люголевским раствором и др. В другой группе флоккуляционных проб реактив является коллоидным раствором, устойчивость которого нарушается при до­бавлении к нему небольшого количества дис- или парапротеинемической сыворотки (тимо­ловая, золотоколлоидальная пробы и др.).

Тимоловая проба основана па определении степени помутнения коллоидного тимолового реактива при добавлении к нему 1До объема сыворотки. Она бывает положительной преиму­щественно при увеличении в сыворотке содержания р-липопротеинов. Это одна из постоян­но положительных проб при вирусном гепатите, диффузных поражениях печени. Она отри­цательна при механической желтухе.

При значительном увеличении количества глобулинов и особенно фибриногена положи­тельной оказывается формоловая проба - превращение сыворотки в студневидную массу (желатинизация) от прибавления формалина.

Все осадочные пробы (их предложены десятки) неспецифичны, их изменения обнаружи­ваются не только при заболеваниях печени, но и при миеломной болезни, коллагенозах и др. Эти пробы выявляют диспротеинемию, но гораздо более простыми и доступными способа­ми, чем электрофорез.

Протромбин (II фактор свертывания крови) синтезируется только в печени при участии витамина К. Причиной гипопротромбинемии может быть как нарушение способности гепатоцитов к синтезу протромбина, так и недостаток жирорастворимого витамина К, поступаю­щего в печень из кишечника. При механической желтухе, когда всасывание жиров, а с ними и витамина К нарушается, выработка печенью протромбина и содержание его в крови пада­ют. Для выяснения причины гипопротромбинемии применяютпробу с парентеральным вве­дением витамина К . Если после этого содержание протромбина сыворотки увеличивается, значит, протромбинообразовательная функция печени не нарушена. Эта проба помогает диф­ференцировать механическую желтуху от паренхиматозной. Протромбин определяют по ско­рости свертывания рекальцифицированной плазмы в присутствии избытка тромбопластина.

Определение содержания продуктов расщепления белка. Из продуктов расщепления белка некоторое диагностическое значение имеют аминокислоты, мочевина, остаточный азот и ам­миак. Общее количество аминокислот крови повышается только при тяжелые поражениях печени, когда нарушаются ее дезаминирующая и мочевинообразовательная функции, в об­щем довольно устойчивые. Условием для повышения содержания остаточного азота крови при заболеваниях печени является одновременное нарушение функции почек. Повышение остаточного азота при почечной недостаточности отличается от такового при печеночно-по- чечной недостаточности тем, что при первой основным компонентом остаточного азота яв­ляется мочевина, а при второй заметную долю составляют аминокислоты. Раздельное опре­деление аминокислот крови при помощи хроматографии не обеспечивает при поражении пе­чени достаточно четких диагностических данных, чтобы оправдать столь трудоемкую проце­дуру. Некоторое диагностическое значение сохраняет метод определения в осадке мочи кри­сталлов лейцина и тирозина, появляющихся в ней при острой дистрофии печени.

Определения общего белка в сыворотке \плазме\ крови и других биологических жидкостях.

Все известные способы определения концентрации общего белка в сыворотке крови подразделяют на следующие основные группы:

1.Азотометрические, основанные на установлении количества белкового азота - метод Кьельдаля и его модификации.

2.Способы, состоящие в определении плотности сыворотки - неточные, т.к. плотность зависит не только от содержания белков.

3.Весовые - белки сыворотки крови осаждают, высушивают до постоянного веса и взвешивают на аналитических весах. Методы трудоемки и требуют большого количества сыворотки.

4.Рефрактометрические - не совершенны, т.к. часть рефракции обуславливается иными компонентами сыворотки.

5.Колориметрические - наиболее распространенным является биуретовый метод, являющийся унифицированным.

6.Другие методы - нефелометрические, поляриметрические, спектрофотометрические не получили широкого распространения.

Отечественной промышленностью налажен выпуск наборов для исследования концентрации общего белка в сыворотке крови по биуретовой реакции. На этом же принципе основано измерение уровня общего белка в биологических жидкостях с помощью реактивов, поставляемых различными фирмами.

Определение общего белка в сыворотке крови по биуретовой реакции.

Реактивы.

1.0,9% раствор хлористого натрия /0,9 г хлористого натрия на 100 мл дистиллированной воды/.

2.0,2Н раствор едкого натрия, свободного от углекислого газа /20 мл 1Н едкого натрия доводят до 100 мл прокипяченной дистиллированной водой/.

3.Биуретовый реактив: 4,5г сегнетовой соли растворяют в 40 мл 0,2Н раствора едкого натрия, затем прибавляют 1,5 г сернокислой меди и 0,5 г едкого натра. Хранят в посуде из темного стекла, раствор стоек.

4.0,5% раствор йодистого калия в 0,2Н растворе едкого натрия.

5.Рабочий раствор биуретового реактива: 20 мл биуретового реактива смешивают с 80 мл раствора йодистого калия. Раствор стоек.

6.Стандартный раствор альбумина из человеческой или бычьей сыворотки: 10% раствор альбумина в 0,9% растворе хлористого натрия /1 мл раствора содержит 0,1 г белка - 100г/л/.

Принцип метода.

Белки реагируют в щелочной среде с сернокислой медью с образованием соединений, окрашенных в фиолетовый цвет \биуретовая реакция/.

Ход определения: к 5 мл рабочего раствора биуретового реактива прибавляют 0,1 мл сыворотки, смешивают, избегая образования пены. Через 30 мин \ и не позднее часа\ измеряют на ФЭКе в кювете с толщиной слоя 1 см при длине волны 540-560 нм \зеленый светофильтр\ против контроля.

Контроль : к 5 мл рабочего раствора биуретового реактива прибавляют 0,1 мл 0,9% раствора хлористого натрия, далее обрабатывают как опыт.

Расчет ведут по калибровочному графику.

Нормальные величины общего белка - 65-85 г\л.

Построение калибровочного графика.

Реактив: стандартный раствор альбумина 10% в 0,9% растворе хлористого натрия, 1 мл которого содержит 0,1 г белка. Для приготовления реактива можно использовать лиофилизированный альбумин из набора «Билирубин-эталон» фирмы Лахема. В инструкции набора указывается содержание альбумина в мг. Исходя из этого, делаем расчет, сколько необходимо к данному альбумину прилить 0,9% хлористого натрия, чтобы получить в 1 мл раствора 0,1 г белка.

Например: в инструкции набора указано, что лиофилизированный альбумин содержит 160 мг альбумина. Расчет: стандартный 10% раствор содержит 10г или 10 000 мг в 100 мл

в эталоне 160 мг в Х

Х = 1,6 мл, т.е. добавляем в бутылочку, где содержится альбумин 1,6 мл 0,9% хлористого натрия и получаем, что 1 мл этого раствора содержит 0,1 г белка.

После приготовления стандартного раствора готовим из него серию рабочих разведений по таблице:

Вычисление концентрации белка в г\л.

1 мл стандартного 10% р-ра содержит 0,1 г белка

0,04 г белка содержится в 1 мл раствора

Х в 1 000 мл

Из каждого рабочего разведения соответствующей концентрации берут по 0.1 мл в 3-4 пробирки, т.е. каждое определение проводят в 3-4 параллелях и в каждую пробирку прибавляют по 5 мл биуретового реактива. Через 30-60 мин колориметрируют на ФЭКе против контроля. Получаем на каждую концентрацию 3-4 показания оптической плотности. Находим из них среднее арифметическое, предварительно отбросив резко отклоняющиеся показания.

Строим калибровочный график: по оси абсцисс откладываем концентрацию белка в г\л, т.е. 40-60-80-100г\л; а по оси ординат показания оптических плотностей, полученных на ФЭКе \среднее арифметическое/.

Калибровочная кривая должна иметь вид примой, проведенной через 3 точки. Данную кривую проверяют на сыворотках доноров \не менее 3-4 определений\. При получении нормальных показаний белка, т.е. в пределах нормы; построенную калибровочную кривую используют в работе.

Примечание.

1.Калибровочную кривую необходимо строить не менее 1 раза в год, а также каждый раз после ремонта и на вновь полученном фотоэлектроколориметре.

2.Линейная зависимость между оптической плотностью и концентрацией сохраняется до Д=0,5. Если в сыворотке содержится большее количество белка, то сыворотку разводят хлористым натрием вдвое.

Определение мочевины в крови и моче.

Мочевина является основным азотсодержащим продуктом катаболизма белков.

При распаде белков накапливается аммиак – токсичное вещество. Основным путем обезвреживания аммиака является синтез мочевины в печени. Концентрация мочевины в крови зависит от скорости ее образования в печени и удаления из организма через почки с мочой.

У большинства пациентов скорость образования мочевины отражает скорость утилизации и распада клеточного белка.

При тяжелой патологии печени способность гепатоцитов синтезировать мочевину нарушается, аммиак накапливается, а содержание мочевины в крови снижается.

Выведение образовавшейся мочевины происходит с мочой и зависит от выделительной функции почек.

Определение мочевины проводится следующими методами:

1. Химический метод по цветной реакции с диацетилмонооксимом.

2. Ферментативный метод (уреазный)

3. Метод «сухой химии».

Определение мочевины по реакции с диацетилмонооксимом.

Реактивы.

1.Диацетилмонооксим и тиосемикарбазид или реагент в таблетках.

2.Эталонный или стандартный раствор, содержащий в 100 мл 100 мг мочевины или в 1 мл - 1 мг.

Приготовление растворов.

Раствор реагента: 1 таблетку растворить при нагревании в мерной колбе на 50 мл в 30 мл дистиллированной воды. После охлаждения довести объем до отметки. Раствор устойчив несколько недель.

Раствор серной кислоты: в мерную колбу на 250 мл вносят 150 мл дистиллированной воды и 25 мл 96% серной кислоты ЧДА. Нагревают после охлаждения доводят объем до метки. Раствор устойчив.

Рабочий раствор реагента и серной кислоты готовится перед реакцией в соотношении 1:1 (см. схему определения).

Принцип метода.

Мочевина образует с диацетилмонооксимом при наличии тиосемикарбазида и солей железа в сильно кислой среде комплекс красного цвета, интенсивность окраски пропорциональна концентрации мочевины.

Ход определения.

Реактивы Опыт Контроль Стандарт

1.сыворотка 0,02 - -

2.рабочий раствор

а\раствор реагента 2,0 2,0 2,0

б\раствор серной

кислоты 2,0 2,0 2,0

3.стандартный р-р

мочевины - - 0,02

Выдержать 10 минут в кипящей водяной бане. Охладить 2-3 минуты в струе холодной воды. Колориметрировать не позднее, чем через 15 минут: светофильтр зеленый \при длине волны 490-540\, кювета на 1 см, против контроля.

Расчет : До

Х= -------- * С ст в ммоль\л, где

До - оптическая плотность опыта;

Дст - оптическая плотность стандартного раствора мочевины или эталона;

С ст - концентрация мочевины в стандартном растворе;

Х - концентрация мочевины в пробе сыворотки.

Для пересчета мг % в ммоль\л используется коэффициент – 0,1665.

Нормальные величины мочевины в сыворотке крови - 2,5 -8,3 ммоль\л.

Примечания.

1. Выше приведенный ход определения можно модифицировать, увеличив объемы всех отмериваемых растворов в 2-3 раза, в зависимости от объема кювет.

3. Перерасчет показателей мочевины в азот мочевины можно сделать умножением на фактор 0,466.

4. Тиосемикарбазид является ядовитым реактивом. При работе с ним необходимо соблюдать правила работы с ядовитыми веществами.

При заболеваниях печени особенно широко проводятся исследования белкового обмена, так как состояние белкового обмена и его нарушение отражает функциональное состояние печени.

Некоторое значение имеет общее снижение количества белка в сыворотке крови ниже 6,5-8,5% и в особенности изменение соотношения его фракций, которое в норме составляет 4,5-5,5% для альбуминов и 2-2, 5% для глобулинов. Такое соотношение соответствует альбуминово-глобулиновому коэффициенту, равному 1,5-2,0.

Отклонение от указанных взаимоотношений указывает на нарушение белкового обмена. В частности, снижение альбуминов часто говорит о серьезном повреждении паренхимы печени, поэтому для исследования белкового обмена используют фракционное исследование белков крови. Большое клиническое значение имеет снижение альбумина крови ниже 3,5%; прогноз становится плохим при его снижении до 2,5%.

Уменьшение количества альбуминов и, следовательно, снижение альбуминово-глобулинового коэффициента наряду с некоторыми внепеченочными заболеваниями (общее истощение) встречается также при циррозах печени и хроническом гепатите.

Исследование белковых фракций

Введение в практику метода электрофореза, т. е. метода разделения сывороточного белка на отдельные фракции при прохождении электрического тока, дало возможность более детально изучить соотношение отдельных фракций, в частности глобулинов. В щелочной среде белковые фракции распределяются таким образом, что ближе всего к аноду располагаются мелкодисперсные альбумины, затем по восходящей величине белковых частиц a-1, a-2, в- и у-глобулины. Последние как наиболее грубодисперсные находятся ближе всех к катоду. Содержание альбуминов составляет в среднем 55-56%, a1-глобулинов - 5-6%, а2- глобулинов - 8-9%, и-глобулинов - 13-14%, у-глобулинов - 16-17%. Количество а2-глобулинов повышается при дистрофических процессах в соединительной ткани, коллагенозах и других патологических процессах, а количество глобулинов повышается при жировой дистрофии печени. Увеличение у-глобулинов, доходящее до 30-50%, отмечается при циррозах и диффузных гепатитах, умеренное повышение - при остром гепатите и воспалительных процессах; оно является надежным показателем перехода гепатита в цирроз. Повышение у-глобулинов обнаруживают также при различных воспалительных процессах.

Статью подготовил и отредактировал: врач-хирург

Видео:

Полезно:

Статьи по теме:

1. При терапевтических заболеваниях, как и при многих других болезнях, очень большую пользу приносит общетерапевтический биохимический...
2. Уровень глобулина повышен при остром дистрофическом поражении печени, в ранние сроки механической желтухи, при амилоидозе...
3. Исследование углеводного обмена с помощью определения сахара крови имеет значение для определения нарушений обмена углеводов...