Оглавление темы "Методы обнаружения вирусов. Методы диагностики микозов (грибковых заболеваний). Методы обнаружения простейших.":

Выявление противовирусных антител (AT) в сыворотке крови. РТГА. РСК. РИФ. Иммуносорбционные методы выявления противовирусных антител.

Более простой и доступный подход - выявление противовирусных антител (AT) в сыворотке . Образцы крови необходимо отбирать дважды: немедленно после появления клинических признаков и через 2~3 нед. Чрезвычайно важно исследовать именно два образца сыворотки. Результаты однократного исследования нельзя считать окончательными из-за невозможности связать появление AT с настоящим случаем. Вполне возможно, что эти AT циркулируют после предшествующей инфекции. В подобной ситуации роль исследования сыворотки, полученной в период рекон-валесценции, трудно переоценить. На наличие заболевания в период отбора первой пробы указывает не менее чем четырёхкратное увеличение титра AT, выявленное при исследовании второй пробы.

Перечисленные ниже методы не позволяют дифференцировать антитела (AT), образующиеся во время болезни и циркулирующие после выздоровления (продолжительность этого периода вариабельна для различных инфекций). Поскольку для адекватной диагностики необходимо подтвердить достоверное увеличение титров AT в двух пробах, то первую пробу исследуют в острой фазе, а вторую - в период выздоровления (через 2-3 нед). Полученные результаты носят ретроспективный характер и более пригодны для проведения эпидемиологических обследований.

РТГА выявляет AT, синтезируемые против гемагглютининов вирусов (например, вируса гриппа). Метод позволяет легко выявлять подобные антитела (AT) в сыворотке больного.

РСК - основной метод серодиагностики вирусных инфекций (среди доступных). Реакция выявляет комплементсвязывающие IgM и IgG, но не дифференцирует их; для оптимизации получаемых результатов постановка реакции требует определённых навыков персонала.

РИФ . При возможности получить биоптат инфицированной ткани и доступности коммерческих наборов AT, меченных флюоресцеином, диагноз может подтвердить реакция прямой иммунофлюоресценции. Постановка реакции включает инкубацию исследуемой ткани с AT, их последующее удаление и люминесцентную микроскопию образца.

Иммуносорбционные методы выявления противовирусных антител

Иммуносорбционные методы (например, ИФА и РИА) более информативны, поскольку выявляют IgM и IgG по отдельности, что позволяет делать определённые выводы о динамике инфекционного процесса или состоянии реконвалесценции. Для выявления AT известный Аг сорбируют на твёрдом субстрате (например, на стенках пробирок, пластиковых микропланшетах, чашках Петри) и вносят различные разведения сыворотки пациента. После соответствующей инкубации несвязавшиеся AT удаляют, вносят антисыворотку к Ig человека, меченную ферментом, повторяют процедуру инкубирования и отмывания несвязанных AT и вносят какой-либо хромогенный субстрат (чувствительный к действию фермента). Поскольку изменение окраски пропорционально содержанию специфических AT, то вполне возможно определение их титра спектрофотометрическим способом. В диагностике ВИЧ-инфекции наи- большее распространение нашёл метод иммуноблотннга.

Реакция Вассермана (RW) — это самая популярная иммунологическая реакция, применяемая для диагностики сифилиса , начиная со времени своего открытия в 1906 году. RW относится к группе реакций связывания комплемента (РСК) и основывается на способности сыворотки крови больного сифилисом образовывать комплекс с соответствующими антигенами. Современные методики РСК, применяемые для диагностики сифилиса, значительно отличаются по своим антигенам от классической реакции Вассермана, однако, термин «реакция Вассермана» за ними традиционно сохраняется.

В крови заразившегося человека появляются антитела, выработанные иммунной системой. В возбудителе заболевания — бледной трепонеме (Treponema pallidum), содержится антиген кардиолипин, который вызывает выработку антител, определяемых с помощью RW. Положительная реакция Вассермана как раз и свидетельствует о присутствии таких антител в крови человека и на этом основании делается вывод о наличии заболевания.

Показателем результата исследования в РСК служит реакция гемолиза. В реакции участвуют два компонента: эритроциты барана и гемолитическая сыворотка. Гемолитическую сыворотку получают путем иммунизации кролика эритроцитами барана. Её инактивируют в течение 30 минут при температуре 56°С. Результаты РСК оценивают в зависимости от наличия или отсутствия гемолиза в опытных пробирках. Наличие гемолиза объясняется тем, что если в испытуемой сыворотке отсутствуют сифилитические антитела, то реакция антиген-антитело не происходит, и весь комплемент идет на реакцию бараньи эритроциты-гемолизин. А если имеются специфические антитела, комплемент полностью уходит на реакцию антиген-антитело и гемолиза не происходит.

Все ингредиенты для реакции Вассермана берутся в одинаковом объеме — 0,5 или 0,25 мл. Для прочной фиксации комплемента на специфическом комплексе, смесь исследуемой сыворотки, антигена и комплемента помещают в термостат при температуре 37° на 45-60 мин. (I фаза реакции), после чего вносят гемолитическую систему, состоящую из бараньих эритроцитов и гемолитической сыворотки (II фаза реакции). Далее пробирки вновь помещают в термостат на 30-60 минут до наступления гемолиза в контроле, в котором антиген заменяют физиологическим раствором, а вместо исследуемой сыворотки вносят физиологический раствор. Антигены для реакции Вассермана выпускают в готовом виде с указанием титра и способа разведения.

Максимальную позитивность реакции Вассермана принято обозначать количеством крестов: ++++ (резко положительная реакция) — свидетельствует о полной задержке гемолиза; +++ (положительная реакция) — соответствует значительной задержке гемолиза, ++ (слабоположительная реакция) — свидетельство частичной задержки гемолиза, + (сомнительная реакция) — соответствует о незначительной вдержке гемолиза. Отрицательная RW характеризуется полным гемолизом во всех пробирках опыта.

Однако, иногда возможны и ложноположительные результаты — это связано с тем, что кардиолипин в некотором количестве содержится и в клетках человеческого организма. Иммунная система человека не создает антител против «собственного» кардиолипина, но из этого правила бывают и исключения, благодаря которым положительная реакция Вассермана возникает у совершенно здорового человека. Особенно часто это наблюдается после перенесенных тяжелых вирусных и прочих заболеваний — пневмонии, малярии, болезней печени и крови, при беременности, т.е. в моменты серьезного ослабления иммунитета.

Если врач подозревает у пациента ложноположительный результат на реакцию Вассермана, то он может назначить ему ряд дополнительных исследований, которые обычно применяются при диагностике заболеваний, передающихся половым путем.

Заболевания и случаи, при которых врач может назначить анализ крови на RW

Проведение процедуры сдачи анализа крови на RW

Кровь на RW сдается только натощак. Крайний прием пищи должен быть не позднее 6 часов до сдачи анализа. Медицинский работник усаживает пациента или укладывает на кушетку и осуществляет забор 8-10 мл крови из локтевой вены.

Если анализ необходимо сделать младенцу, то забор осуществляется из черепной или яремной вены.

Подготовка с сдаче анализа крови на RW

За 1—2 суток до сдачи анализа следует прекратить употребление спиртных напитков. Также не рекомендуется есть жирную пищу — она может исказить результат. В период подготовки к анализу следует воздержаться от приема препаратов наперстянки.

Противопоказания

Результат анализа будет ложным, если:

• человек болен инфекционным заболеванием или только переболел им,
• у женщины период менструации,
• беременная в последние недели перед родами,
• первые 10 дней после родов,
• первые 10 дней жизни младенца.

При первичном сифилисе реакция Вассермана становится положительной на 6-8 неделе течения заболевания (в 90 % случаев), при этом отмечается следующая динамика:

• в первые 15-17 дней после заражения реакция у большинства больных, как правило, отрицательная;
• на 5-6-й неделе заболевания примерно у 1/4 части больных реакция становится положительной;
• на 7-8-й неделе заболевания RW становится положительной у большинства.

При вторичном сифилисе RW положительна всегда. Вместе с другими серологическими реакциями (РПГА, ИФА, РИФ) позволяет не только выявить наличие возбудителя, но и выяснить приблизительный срок заражения.

При развитии сифилитической инфекции на 4-й неделе заболевания, после возникновения первичной сифиломы, реакция Вассермана переходит из отрицательной в положительную, оставаясь таковой и во вторичном свежем, и во вторичном рецидивном периоде сифилиса. В скрытом вторичном периоде и без лечения RW может переходить в отрицательную с тем, чтобы при наступлении клинического рецидива сифилиса вновь стать положительной. Поэтому, в скрытом периоде сифилиса отрицательная реакция Вассермана не свидетельствует о его отсутствии либо излеченности, а лишь служит благоприятным прогностическим симптомом.

При активных поражениях третичного периода сифилиса положительная RW встречается приблизительно в 3/4 случаев заболевания. Когда же активные проявления третичного периода сифилиса исчезают, она часто переходит в отрицательную. В этом случае отрицательная реакция Вассермана у больных не свидетельствует о том, что у них нет сифилитической инфекции.

При раннем врожденном сифилисе RW практически во всех случаях положительна и является ценным методом для верификации болезни. При позднем врожденном сифилисе результаты ее соответствуют таковым, полученным в третичном периоде приобретенного сифилиса.

Большое практическое значение имеет исследование реакции Вассермана в крови у больных сифилисом, подвергающихся лечению. У некоторых больных, несмотря на энергичную противосифилитическую терапию, реакция Вассермана не переходит в отрицательную — это так называемый серорезистентиый сифилис. В данном случае проводить бесконечно противосифилитическую терапию, добиваясь перехода положительной RW в отрицательную, не имеет смысла.

Из изложенного выше следует, что отрицательная реакция Вассермана, не всегда является признаком отсутствия сифилитической инфекции в организме.

Возможна положительная реакция Вассермана у людей при ряде других, не связанных с сифилисом заболеваниях и состояниях:

Всё перечисленное свидетельствует о том, что положительный результат реакции Вассермана, еще не является безусловным доказательством наличия сифилитической инфекции.

Восстановление после сдачи анализа

После сдачи анализа крови врачи рекомендуют правильное и сбалансированное питание, а также как можно больше жидкости. Можно позволить себе теплый чай и шоколад. Будет полезным воздержаться от физических нагрузок и ни в коем случае не принимать алкоголь.

Нормы

В норме в крови должен наблюдаться гемолиз — это считается отрицательной реакцией на сифилис (Реакция Вассермана отрицательная). Если же гемолиз отсутствует, оценивается степень реакции, которая зависит от стадии заболевания (помечается знаками «+»). При этом следует знать, что у 3-5% совершенно здоровых людей реакция может быть ложноположительной. В то же время, в первые 15-17 дней после заражения, реакция у больных людей может быть ложноотрицательной.

Диагностика является важнейшим этапом в лечении любого заболевания. В зависимости от правильно поставленного диагноза находится не только успешное лечение, но и возможность предотвратить развитие осложнений и сопутствующих патологий. Серологическое исследование что это такое? Это метод диагностического анализа биологического образца пациента на предмет наличия антител и антигенов. Тест позволяет выявить десятки заболеваний, фазу болезни и контролировать лечение.

Для чего назначается исследование

Этот тип медицинского исследования широко применяется в различных областях медицины. Реакция связывания комплемента или РСК направлена на выявление в сыворотке крови специфических клеток, антител, которые вырабатывает организм для борьбы с инфекциями и вирусами.

Изосерологическое исследование направлено на определение группы крови, резус-фактора и других параметров крови пациента.

• Серологический анализ крови используется в гинекологии для выявления заболеваний, передающихся половым путем. Также серологическое титрование используется для комплексного обследования будущих мам (токсоплазмоз, ВИЧ, сифилис и пр.). При постановке на учет беременных, это обязательный тест.
• В педиатрии серологические реакции применяются для подтверждения диагноза «детских» болезней (ветрянка, краснуха, корь и пр.), если симптомы выражены не ярко и нет возможности определить недуг по клиническим показаниям.
• Серологические исследования позволяют венерологам быстро и безошибочно ставить диагноз. При схожих симптомах и жалобах анализ крови позволяет выявить антитела к сифилису, лямблиозу, уреплазмозу, хламидиозу, герпесу и другим заболеваниям.
• Гастроэнерологи, гепатологи и инфекционисты используют серологический анализ крови для диагностики вирусного гепатита.
• Подозрение на любое инфекционное или вирусное заболевание может возникнуть у терапевта. Для подтверждения используются серологические реакции на специфические антитела в организме. Проводится анализ на энцефалит, бруцеллез, коклюш, вирус Денге, вирус иммунодефицита, аллергию и пр.
• Серологическая диагностика для госпитализации играет важную роль. Этот метод диагностики может показать, на какой стадии развития находится болезнь, и требуется ли немедленное оформление в стационар или достаточно амбулаторного лечения.

В качестве биологического материала для исследования может использоваться образец слюны и кала, но чаще всего используется венозная кровь пациента. Анализ для серологических реакций должен браться из локтевой вены в лабораторных условиях. Перед тем как сдать анализ следует проконсультироваться с лечащим врачом и подготовиться.

Подготовка к анализу

Этот тип исследования проводится как в муниципальных, так и в коммерческих учреждениях. Выбор лучше сделать в пользу той лаборатории, которая располагает самым современным оборудованием и имеет только положительные отзывы о своей работе. Для занятых пациентов лаборатория может предоставлять услуги по забору крови на РСК дома.

В этом случае пациенту не приходиться тратить время на дорогу, а очереди исключены.

Подготовка к забору венозной крови включает в себя несколько общих правил. Перед тестом нельзя употреблять пищу, то есть анализ берется натощак. Сдавая кровь необходимо находиться в состоянии спокойствия и не волноваться. Перед процедурой не следует проходить другие процедуры (рентгенография, ультразвуковое обследование и пр.). За несколько недель до забора крови по согласованию с лечащим врачом отменяется прием лекарственных препаратов. Некоторые рекомендации зависят от болезни, на которую проводится тест. Например, при исследовании на гепатит за 2 дня до анализа из рациона исключают жирную пищу и алкоголь.

Реакция флюоресценции

Один из видов серологических реакций флюоресценция или РИФ. Этот метод исследования проводится с использованием реагента, который подсвечивает искомые антитела в сыворотке крови. Для постановки серологической реакции прямого типа или ПИФ специфические антитела помечаются флюоресцирующим веществом. Это самый быстрый тип исследований, который проводится в один этап.

Другой способ, который называется непрямым или РНИФ, проводится в 2 стадии. На первой специфические клетки (антитела) не имеют флюоресцирующих меток, а на второй используются соответствующие меченые антитела для выявления комплекса антиген-антитело. Реакция свечения появляется только после связи со специфическим антителом. Результат манипуляций оценивается специальным прибором, который оценивает интенсивность излучения, а также определяет форму и размер исследуемых объектов. Инфекционный агент определяется с достоверностью 90-95% в зависимости от типа и стадии заболевания.

Иммуноферментный анализ

Для исследования ИФА серологические реакции проводятся с использованием уникальных стабильных реагентов. Вещества с меткой присоединяются к определенному (искомому) типу антител. В результате серология дает качественную или количественную оценку по образцу крови пациента. Если субстрат не имеет выраженных маркеров, результат считается отрицательным. В случае качественного исследования положительный результат означат только присутствие антител в биологическом образце.

Серодиагностика с количественным определением клеток антител дает более полную картину. По сумме выявленных клеток врач может сказать находится ли заболевание в начальной стадии, острой или это обострение хронической формы болезни. При постановке диагноза также учитывается киническая картина и жалобы пациента.

Особенности исследований

При исследовании на бруцеллез проводится контроль сыворотки крови на самозадержку без антигена. Это позволяет повысить достоверность теста. Результат анализа на бруцеллез может быть положительным, отрицательным или невыраженным, то есть вызывающим сомнения. При получении сомнительных результатов, рекомендуется повторный забор крови. Также бруцеллез диагностируется по результатам посева крови, исследования костного мозга и спинно-мозговой жидкости.

Достоинства и недостатки серологии

Диагностика с применением серологических методов широко используется в современной медицине. Особенно актуален этот тест при выявлении вирусных и инфекционных заболеваний. Этот же тип анализов используется при географических скринингах и медицинских обследованиях для предотвращения эпидемиологических вспышек.

Серологические анализы имеют ряд преимуществ.

• Серологический тест любого типа имеет высокую достоверность.
• Анализы на серологию проводятся достаточно быстро. Результат РСК известен уже через сутки, а получить его можно посредством интернета, не выходя из дома. В особых случаях при стационарном лечении тест проводится в течение нескольких часов.
• РСК позволяет контролировать развитие болезни, и отслеживать эффективность проводимого лечения.
• Серологические методы исследования отличаются невысокой стоимостью и доступны пациентам.

Серологические анализы имеют и некоторые недостатки. Для того, чтобы обследование дало максимально достоверную информацию анализ крови следует проводить с учетом времени инкубационного периода болезни.

Простой герпес 1 и 2 типа можно определить только спустя 2 недели после заражения, а исследование на вирус иммунодефицита проводится спустя 1, 3 и 6 месяцев после контакта с больным.

На достоверность исследования может повлиять человеческий фактор. Если пациент пренебрегает правилами подготовки к исследованию или лаборант допустил ошибку в обработке образца крови, возможно получение ложного или сомнительного результата. Такая ситуация возникает приблизительно в 5% случаев. Как правило, лечащий врач на основании клинических показаний легко вычисляет ошибку РСК.

Серологическое исследование крови современный и надежный способ выявления таких опасных заболеваний как ВИЧ, гепатит, бруцеллез, ЗППП и пр. Этот раздел медицины направлен на изучение плазмы крови человека и ее иммунологических свойств. Серологический метод широко распространен, а стоимость исследований в частных лабораториях сравнительно невысока. Для проведения анализа используется современное оборудование, которое сводит к минимуму влияние человеческого фактора на результаты исследований.

Вконтакте

Инфекционные болезни инициируют выработку в крови болеющего человека соответствующих антител. Так работает иммунная защита организма.

Определение наличия антител к конкретному вирусу или бактерии дает возможность узнать о наступлении заболевания до появления его основных симптомов. Сегодня серологическое и дают наиболее полную картину. Поэтому мы и поговорим в данной статье об анализе на серологическое исследование.

Что такое серологические исследования

Методы изучения биологических материалов людей и животных, способные выявлять в них антитела или антигены, которые вырабатывает организм в виде защитной реакции в борьбе с инфекциями, называют серологические исследования. Такие методы применяют для определения возбудителя инфекции, а также с целью:

• определения группы крови,
• изучения иммунитета через определение уровня его гуморального звена,
• определения тканевых антигенов.

Кому его назначают

Зачем его делать

Метод ценится специалистами как способ сделать качественную диагностику заболевания.

• Если больной находится в стадии заболевания, то повторные исследования рекомендуется проводить с интервалом примерно – неделя, чтобы наблюдать за эффективностью применяемого лечения.
• Часто серологические исследования используют, чтобы определить, какой возбудитель вызвал болезнь уже после того, как пациент ее перенес.

Виды процедуры

Методы серологических исследований используют в своей основе различные реакции:

• Реакция нейтрализации полагается на свойстве антител иммунной сыворотки действовать как нейтрализующее средство на токсины или сами микроорганизмы, предупреждая их повреждающее действие.
• Реакция агглютинации , которая, в свою очередь, подразделяется на такие подвиды:
  • прямые реакции – их применяют при исследовании сыворотки крови на присутствие антител. В изучаемый состав вбрасывают убитые микробы и, если выпадает осадок в виде хлопьев, то значит, что на этот вид микробов реакция положительная;
  • реакция непрямой гемагглютинации производится введением в сыворотку крови эритроцитов, на которых адсорбированы антигены; эти агенты входят во взаимодействие с такого же рода антигенами, присутствующими в сыворотке крови, в результате этого выпадает фестончатый осадок.
• Реакция с участием комплемента применяют для выявления инфекционных болезней. Метод реализуется через активацию комплемента и наблюдением за происходящими реакциями в исследуемой среде.
• Реакция преципитации осуществляется наслоением раствора антигена на жидкую среду – иммунную сыворотку. Антиген для этого метода применяют растворимый. Реакция заключается в том, что комплекс антиген-антитело претерпевает осаждение; полученный осадок называют преципитатом.
• Реакция с использованием меченых антигенов и антител основана на том, что микробы или антигены тканей, обработанные определенным образом, получают способность под действием ультрафиолетовых лучей излучать свет. Метод используют не только при диагностировании антигенов, но и для определения лекарственных веществ, ферментов, гормонов.

Противопоказания для проведения

В связи с тем, что метод заключается в изучении биологического материала пациента, он не может воздействовать негативно на человека. Поэтому противопоказаний к применению не имеется.

Исследование полностью безопасно.

Как проводится серологическое исследование, расскажем ниже.

Показания для проведения

Метод применяют для определения возбудителя инфекции, в том числе при таких заболеваниях:

• ВИЧ-инфекция,
• токсоплазмоз,
• инфекционные болезни, полученные половым путем;
• дифтерия,
• наличие ;
• бруцеллез,
• стафилококковые инфекции,
• гепатит.

Также метод используют для выявления таких заболеваний:

• описторхоз,
• амебиаз,
• цистицеркоз,
• лямблиоз,
• пневмония.

Подготовка к процедуре

Особых приготовлений к процедуре не требуется. Следует соблюдать одно условие: забор крови делается натощак.

Алгоритм забора (взятия) крови (материала) на серологическое исследование описан ниже.

Проведение анализа

Забор крови делают из локтевой вены. Для того чтобы исследование получилось, кровь набирают не шприцом, а самотеком. В вену вводят иглу без шприца и собирают в пробирку до 5 мл крови.

Во время процедуры пациент испытывает небольшой дискомфорт во время введения иглы в вену. Последующие действия совсем не вызывают беспокойства.

Расшифровка результатов серологического исследования крови описана ниже.

Расшифровка результатов

Полученные результаты следует рассматривать совместно с клинической картиной болезни, проверкой предполагаемого диагноза с использованием нескольких тестов. Это связано с тем, что исследования имеют специфичный характер и иногда не обладают абсолютной чувствительностью к инфекционным заболеваниям.

Цена на комплексное серологическое исследование крови описана ниже.

Средняя стоимость процедуры

Какая цена процедуры будет зависеть от вида исследования. Она состоит из стоимости произведения анализа и стоимости антител к определенному возбудителю болезни. Средняя стоимость процедуры в пределах 700 руб.

Серологические реакции описаны в видео ниже:

Серологический метод исследования.

Реакции антиген-антитело

Особенности взаимодействия антитела с ан­тигеном являются основой диагностических реакций в лабораториях.

Реакция in vitro меж­ду антигеном и антителом состоит из :

специ­фической

неспецифической фазы.

В специ­ фическую фазу происходит быстрое специфи­ческое связывание активного центра антитела с детерминантой антигена.

Затем наступает неспецифическая фаза - более медленная, ко­торая проявляется видимыми физическими явлениями , например образованием хлопьев (феномен агглютинации) или преципитата в виде помутнения. Эта фаза требует наличия определенных условий (электролитов, опти­мального рН среды).

С этой целью применяют серологические методы (от лат. serum - сыворотка и logos - учение), т. е. методы изучения антител и антигенов с помощью реакций антиген-антитело, определяе­мых в сыворотке крови и других жидкостях, а также тканях организма.

При выделении микроба от больного про­водят идентификацию возбудителя путем изучения его антигенных свойств с помощью иммунных диагностических сывороток, т. е. сывороток крови гипериммунизированных животных, содержащих специфические ан­титела. Это так называемая серологическая идентификация микроорганизмов.

Реакции агглютинации

Реакция агглютинации - РА (от лат. aggluti natio - склеивание) - простая по постановке реакция, при которой происходит связыва­ние антителами корпускулярных антигенов (бактерий, эритроцитов или других клеток, нерастворимых частиц с адсорбированными на них антигенами, а также макромолекулярных агрегатов). Она протекает при наличии электролитов, например при добавлении изо­тонического раствора натрия хлорида.

Применяются различные варианты реакции агглютинации :

развернутая,

ориентировоч­ная,

непрямая и др.

Реакция агглютинации проявляется образованием хлопьев или осад­ка (клетки, «склеенные» антителами, имеющими два или более антигенсвязывающих центра).

Ра используют для:

1) определения антител в сыворотке крови боль ных , например, при бруцеллезе (реакции Райта,Хеддельсона), брюшном тифе и паратифах (реакция Видаля) и других инфекционных болезнях;

определения возбудителя , выделенного от больного;

определения групп крови с использованием моноклональных антител против алло-антигенов эритроцитов.

Для определения у больного антител ставят развернутую реакцию агглютинации: к разве­дениям сыворотки крови больного добавля­ют диагностикум (взвесь убитых микробов,) и через несколько часов инкубации при 37 °С отмечают наибольшее разведение сыворотки (титр сыворотки), при котором произошла агглютинация, т. е. образовался осадок.

Характер и скорость агглютинации зави­сят от вида антигена и антител. Примером являются особенности взаимодействия диагностикумов (О- и К-антигенов) со специ­фическими антителами. Реакция агглютина­ции с О-диагностикумом (бактерии, убитые нагреванием, сохранившие термостабильный О-антиген) происходит в виде мелкозернис­той агглютинации. Реакция агглютинации с Н-диагностикумом (бактерии, убитые фор­малином, сохранившие термолабильный жгу­тиковый Н-антиген) - крупнохлопчатая и протекает быстрее.

Если необходимо определить возбудитель, выделенный от больного, ставят ориентиро­ вочную реакцию агглютинации, применяя диа­гностические антитела (агглютинирующую сыворотку), т. е. проводят серотипирование возбудителя. Ориентировочную реакцию проводят на предметном стекле. К капле диа­гностической агглютинирующей сыворотки в разведении 1:10 или 1:20 добавляют чистую культуру возбудителя, выделенного от больно­го. Рядом ставят контроль: вместо сыворотки наносят каплю раствора натрия хлорида. При появлении в капле с сывороткой и микроба­ми хлопьевидного осадка ставят развернутую реакцию агглютинации в пробирках с увели­чивающимися разведениями агглютинирую­щей сыворотки, к которым добавляют по 2-3 капли взвеси возбудителя. Агглютинацию учитывают по количеству осадка и степени просветления жидкости. Реакцию считают положительной , если агглютинация отмеча­ется в разведении, близком к титру диагнос­тической сыворотки. Одновременно учитыва­ют контроли: сыворотка, разведенная изото­ническим раствором натрия хлорида, должна быть прозрачной, взвесь микробов в том же растворе - равномерно мутной, без осадка.

Разные родственные бактерии могут агглю­тинироваться одной и той же диагностической агглютинирующей сывороткой, что затрудня­ет их идентификацию. Поэтому пользуются адсорбированными агглютинирующими сыво­ ротками, из которых удалены перекрестнореагирующие антитела путем адсорбции их родственными бактериями. В таких сыво­ротках сохраняются антитела, специфичные только к данной бактерии. Получение таким способом монорецепторных диагностических агглютинирующих сывороток было предло­жено А. Кастелляни (1902).

Реакция непрямой (пассивной) гемагглюти нации (РНГА, РПГА) основана на использова­ нии эритроцитов (или латекса) с адсорбиро­ ванными на их поверхности антигенами или антителами , взаимодействие которых с соот: ветствующими антителами или антигенами сыворотки крови больных вызывает склеива­ ние и выпадение эритроцитов на дно пробирки или ячейки в виде фестончатого осадка.

При отрицательной реакции эритроци­ты оседают в виде «пуговки». Обычно в РНГА выявляют антитела с помощью антигенно­го эритроцитарного диагностикума, который представляет собой эритроциты с адсорбиро­ванными на них антигенами. Иногда приме­няют антительные эритроцитарные диагнос-тикумы, на которых адсорбированы антитела. Например, можно обнаружить ботулиничес-кий токсин, добавляя к нему эритроцитарный антительный ботулинический диагностикум (такую реакцию называют реакцией обратной непрямой гемагглютинации - РОНГА ). РНГА применяют для диагностики инфекционных болезней, определения гонадотропного гор­мона в моче при установлении беременности, для выявления повышенной чувствительнос­ти к лекарственным препаратам, гормонам и в некоторых других случаях.

Реакция коагглютинации . Клетки возбуди­теля определяют с помощью стафилококков, предварительно обработанных иммунной диагностической сывороткой. Стафилококки, содержащие белок А, имеющий сродство к Fc-фрагменту иммуноглобулинов, неспеци­фически адсорбируют антимикробные анти­тела, которые затем взаимодействуют актив­ными центрами с соответствующими микро­бами, выделенными от больных. В результате коагглютинации образуются хлопья, состо­ящие из стафилококков, антител диагности­ческой сыворотки и определяемого микроба.

Реакция торможения гемагглютинации (РТГА) основана на блокаде, подавлении ан­ тигенов вирусов антителами иммунной сы­воротки, в результате чего вирусы теряют свойство агглютинировать эритроциты. РТГА применяют для диагностики мно­гих вирусных болезней, возбудители которых (вирусы гриппа, кори, краснухи, клещево­го энцефалита и др.) могут агглютинировать эритроциты различных животных.

Реакцию агглютинации для определения антирезусных антител (непрямую реакцию Кумбса) применяют у больных при внутрисосудистом гемолизе. У некоторых таких больных обнаруживают антирезусные антитела, которые являются неполными, одновалент­ными. Они специфически взаимодействуют с резус-положительными эритроцитами, но не вызывают их агглютинации. Наличие таких неполных антител определяют в непрямой реакции Кумбса. Для этого в систему анти-резусные антитела + резус-положительные эритроциты добавляют антиглобулиновую сыворотку (антитела против иммуноглобули­нов человека), что вызывает агглютинацию эритроцитов. С помощью реакции Кумбса диагностируют патологические состо­яния, связанные с внутрисосудистым лизисом эритроцитов иммунного генеза, например ге­молитическую болезнь новорожденных: эрит­роциты резус-положительного плода соединя­ются с циркулирующими в крови неполными антителами к резус-фактору, которые пере­шли через плаценту от резус-отрицательной матери.