Иммуногистохимическое исследование. Иммуногистохимическое исследование — показания и особенности проведения

03.07.2020

Иногда результатов гистологии бывает недостаточно. Если не удается получить окончательный ответ и поставить диагноз или необходимо уточнение молекулярных параметров опухолевого образования назначается иммуногистохимическое исследование.

Что это такое

Метод иммуногистохимии используют как дополнительный. Он помогает выявить в биологическом материале специфичные белки, которые характерны для определенного вида клеток и, как следствие, отличить одну разновидность опухолевого образования от другой. Также исследование помогает выявить:

Маркеры иммуногистохимии, которые отвечают за чувствительность опухоли к воздействию лекарственных средств, лучевой терапии.
Метастатический характер происхождения образования и определить первичный источник поражения.
Гормоны и рецепторы к ним.
Малигнизацию клеток.

ИГХ как метод диагностики широко применяется в онкологии. Этот вид изучения тканей предполагает применение определенных реактивов. Они содержат в себе антитела или белковые соединения, которые помечены определенными веществами.

ВАЖНО! Антитела (иммуноглобулины, специфические белки) вырабатываются различными клетками организма и обеспечивают иммунитет, при внедрении антигена. Часто вырабатываются при попадании вирусов, бактерий, при онкологии, вакцинации, пересадке тканей, а иногда и против собственных клеток, что приводит к аутоиммунным патологиям. Получают их от различных животных. [>

При контакте с антигенами, которые могут содержаться в исследуемом биоптате, происходит специфическая реакция (антигенами являются межклеточные вещества ткани, компоненты клеточных структур). В результате нее можно судить о наличии или отсутствии того или иного вещества в тканях.

ВАЖНО! Антигены - генетически чужеродное тело, которое при попадании в организм вызывает иммунную реакцию, а именно выработку антител для подавления этого чужеродного агента. В случае с ИГХ-анализом антигенами выступают молекулы, которые вырабатываются патологически измененными опухолевыми клетками.

Структурная специфичность исследования - принципиально отличает ИГХ от других способов иммунологической диагностики, которые используют реакцию антиген-антитело. Т. е. специалисты оценивают помимо присутствия тех или иных веществ в тканях (при наличии или отсутствии окрашивания) и их количественный состав (по интенсивности окрашивания), еще пространственное распределение различных структурных элементов (цитоплазма, ядро, мембрана клетки и пр.) в тонком окрашенном срезе.

Способы проведения исследования

Реакцию можно получить несколькими способами. Часто применяется прямой, при котором используется один вид маркированных антител. Последние должны связаться с выявляемым веществом или молекулой-мишенью. Если последняя присутствует в биоптате, то исследуемая ткань окрашивается.

Непрямой метод считается более информативным и чувствительным. Его суть заключается в поэтапном введении 2 разных антител. Немаркированные первичные антитела вступают в реакцию с опухолевым антигеном в биоптате, образуют комплекс антитело-антиген. Затем вводят вторичные уже маркированные антитела (реагент), которые связываются с определенной частью молекулы первичного антитела. Т. е. первичные антитела являются антигенами для вторичных.

Когда назначается исследование?

ИГХ назначается в том случае, когда обычного гистологического исследования недостаточно. Например, когда опухоль молочной железы имеет неспецифичное микроскопическое строение, не позволяющее поставить точный окончательный диагноз.

Что показывает

Биопсия с иммуногистохимией являются важной частью верификации диагноза при раке молочной железы, предстательной железы, мягких тканей и пр. Особенно актуально исследование для выявления лимфом, поскольку зачастую диагностировать эту болезнь без ИГХ невозможно. Большую роль ИГХ исследование играет в определении гистологического типа недифференцированных опухолевых образований, а также метастазов, которые имеют невыясненный первичный очаг.

Иммуногистохимия рака молочной железы полезна в прогнозировании течения опухолевого процесса и возможности таргентной терапии. Она помогает оценить:

функциональное состояние клеток образования;
злокачественный потенциал и темп роста опухоли;
тенденцию к метастазированию.

Как делается анализ?

Чтобы провести исследование, необходимы образцы самой опухоли и близлежащих тканей. Их можно получить при биопсии или после хирургического вмешательства. Материалу необходимо пройти несколько этапов подготовки перед исследованием: фиксация, промывание, обезвоживание, погружение в парафин или заливка другим веществом.

Исследуемый биологический объект должен получиться плотным, но не хрупким. Сначала материал промывают, обезвоживают и уплотняют в спиртах возрастающей крепости. Затем его просветляют путем погружения в смесь абсолютного спирта и О-ксилола в пропорции 1:1. После этого помещают в несколько порций чистого О-ксилола. И только потом биологический объект пропитывают в парафине. Последний этап помогает законсервировать ткань и на долгое время сохранить ее структурные особенности в парафиновом блоке.

Затем лаборант производит с этих блоков срезы, при помощи специального прибора - микротома, толщиной до 1 мкм. Полученные срезы наклеивают на предметное стекло, которое смазано глицерином и смесью белка. Подсушивают.

Чтобы исследуемый материал вступил в реакцию с антителом, необходимо его обезжирить и удалить парафин. Процедура называется депарафинизация. Для ее проведения используют 3 порции О-ксилола, а также спирты нисходящей крепости.

Последний этап - окрашивание. Оно проводится для того, чтобы четко видеть структуру тканей под микроскопом. Лаборанты могут использовать огромное количество красителей. Условно их можно классифицировать по:

происхождению, например, животные - кармин, растительные - гематоксилин, синтетические - эозин;
химическим свойствам, например, нейтральные, основные, кислые.

Чаще всего для этой процедур используют эозин, гематоксилин. Биологический материал помещают в раствор гематоксилина на несколько минут, затем промывают и дифференцируют результаты окрашивания. После этого провидится окрашивание в эозине, промывание и обезвоживание в спиртах восходящей крепости. Последовательная многоэтапная окраска позволяет на каждом этапе все больше определить нозологию и фенотип опухолевого образования. Патоморфолог изучает материл под микроскопом после каждого окрашивания. И только после оценки изменений и интерпретации полученной информации, назначает панель антител.

Чтобы получить точные данные о патологическом процессе и верифицировать заболевание лаборант приступает к обработке подготовленного образца специальными реактивами, содержащими меченые антитела. В результате происходит реакция между антителом и антигеном. Это сопровождается характерной визуализацией, которая зависит от веществ, используемых для маркировки.

Что означают результаты?

Иммуногистохимия молочной железы - это сложный многоступенчатый анализ, на результат которого влияет множество факторов, например, низкое качество реагентов, недостаточная фиксация исследуемого биологического объекта или неправильно подобранная панель антител. Количество искомых клеток-мишеней исчисляется сотнями, поэтому специалист должен понимать, что он ищет и использовать для этого необходимые антитела.

Гистологи оценивают интенсивность окрашивания опухолевых клеток после взаимодействия с реактивами по специальной шкале:

0-1+ - онкологии нет;
2+ - онкологическое образование отрицательное;
3+ - онкологическое образование положительное.

Длительность ИГХ при раке молочной железы во многом зависит от способа его проведения. Бывает ручной и автоматический. Последний считается более совершенным, поскольку вероятность технической ошибки сведена к минимуму, да и проводится он гораздо быстрее.

Перед определением тактики лечения онколог задается различными вопросами: какова вероятность рецидива заболевания у больного или его смерти, какой результат лечения можно ожидать. Для этого специалист изучает особенности и характеристики опухоли и в зависимости от различных предсказывающих и прогностических факторов назначает тактику лечения.

Прогностические факторы

К этим факторам относятся основополагающие признаки, которые определяют особенность протекания болезни и ее исход. При операбельных формах онкологии груди к таким факторам относятся: морфологическое строение и его размер, состояние лимфоузлов. Т. е. подобные характеристики определяют хронологию болезни.

Особенности прогностических факторов:

Базируются на биологических характеристиках опухолевого образования.
Взаимосвязаны с продолжительностью жизни пациента в независимости от тактики терапии.
Делят пациентов по степени риска смерти, рецидива.
Примеры: индекс митотической активности, протеолитические ферменты, антиогенез и др.

Индекс митотической активности (MAI) является независимым прогностическим фактором, который характеризует продолжительность жизни больных. У пациентов с индексом меньше 10 в процессе наблюдения летальный исход составлял 6 %, у пациентов с индексом больше 10 - 28 %.

Протеолитические ферменты имеют значение в процессе метастазирования. В трансформированных злокачественных клетках таких ферментов вырабатывается больше, чем в здоровых, поэтому при злокачественных образованиях наблюдается выход этих веществ в межклеточное пространство и увеличение активности. Т. е. ферменты вовлечены в процесс онкогенеза. Т. о. пациенты с низким уровнем этих ферментов имеют более благоприятный прогноз по безрецидивной выживаемости.

Способность новообразования расти и метастазировать во многом зависит от ангиогенеза - образования новых кровеносных сосудов. В процессе наблюдения пациентов в течение 10 лет, было выявлено, что у женщин с высоким значением плотности микрососудов в опухоли прогноз хуже.

Предсказывающие факторы

Эти факторы предсказывают эффективность лечения. Они помогают выделить группу пациентов с более-менее значимым ответом на проводимую терапию. К примеру, опреелить эффективность гормональных препаратов, уровень рецепторов стероидных гормонов.

К клиническим факторам, которые помогают интерпретировать ответ на терапию при метастатической форме рака относятся:

Локализация и количественный показатель метастазов. Например, при поражении кости - прогноз относительно благоприятный; поражение кости, 2 органов, легких - менее благоприятный; при поражении больше 2 органов, наличии метастаз в печени, мозгу и пр. - неблагоприятный.
Временной интервал между лечением первичного новообразования и появления метастазов. Чем он продолжительнее, тем благоприятнее прогноз.
Общее состояние здоровья пациента.
Возрастная категория. Женщины в постменопаузе имеют больше шансов на благоприятный ответ на терапию.
Рецепторы стероидных гормонов в опухоли (гормононезависимые новообразования не реагируют на гормональное лечение).

Метастатический рак молочных желез считается хронической патологией. После полного регресса, полученного в результате химиотерапии, продолжительность жизни 5-10 лет встречается достаточно редко, примерно в 5-20 % случаев. Поэтому для лечения считается оптимальным вариантом - последовательное применение лечебных воздействий с как можно меньшей токсичностью, чтобы получить максимальный паллиативный эффект и отсрочить прогрессирование патологии, смерти.

Достоверность результатов ИГХ молочной железы достигает 99 %. Методика чувствительна и высокоспецифичная. Она помогает верифицировать патологический процесс и установить стадию заболевания. Для ее проведения необходимо минимум биоптата и реактивов, при этом она будет информативна даже спустя длительное время после взятия биопсии.

В настоящее время качественная диагностика многих онкологических заболеваний невозможна без проведения иммуногистохимического исследования. Это высокоточный и информативный метод, позволяющий не только выявить новообразование, но и разработать оптимальную тактику лечения.

ИГХ обязательно назначают при раке лимфатической системы, когда поражаются лимфатические узлы или внутренние органы

ИГХ исследования – что это такое

ИГХ представляет собой методику, используемую в патологической анатомии для диагностики раковых и доброкачественных опухолей. Его назначают, когда установить точный диагноз стандартным гистологическим способом невозможно или необходима детализация клинически значимых параметров новообразований на молекулярном уровне.

Очень часто гистологии бывает недостаточно. В большинстве случаев причиной этому является крайне нетипичная структура патологического образования, что существенно затрудняет постановку точного диагноза. В частности, при лимфоме и лейкозе ИГХ делают практически всегда.

Нужно отметить, что всего насчитывается около 70 разновидностей лейкозов и лимфом. Верифицировать некоторые их них удается лишь путем нескольких исследований – гистологического, иммуногистохимического и молекулярно-генетического.

Еще один диагноз – «мелкокруглоклеточная опухоль» – может означать 13 злокачественных образований, имеющих разное течение и прогноз. Кроме того, каждое из них требует разработки особой схемы химио- и радиотерапии. Дифференцировать такие опухоли помогает единственный метод – иммуногистохимия.

Суть методики

При развитии любого опухолевого процесса формируются чужеродные организму белки – антигены, в противовес которым иммунная система человека вырабатывает антитела – иммуноглобулины. Они прикрепляются к антигенам и связываются с эпитопами – основными частями антигенных макромолекул. Антитела выполняют сразу две функции: связывающую и эффекторную. Проще говоря, они напрямую мешают антигенам наносить вред и одновременно активируют комплемент, запуская ответную реакцию иммунитета.

Роль антигенов в данном случае принадлежит атипичным опухолевым клеткам. Перед тем как провести иммуногистохимическое исследование, срезы биометариала маркируются специфическими антителами к ним. В целях дальнейшей визуализации эти антитела окрашиваются ферментами. Далее, используя высокоточную оптику, наблюдают за поведением испытуемых клеток.

Если белковые соединения, помеченные как антитела, связываются с опухолевыми клетками, будет видно свечение – флюоресценцию, свидетельствующую о наличии искомых веществ. Так выявляют, например, рецепторы к гормонам и онкомаркеры. При подозрении на рак молочной железы таким образом обнаруживаются рецепторы к эстрогену и прогестерону.

Кому показано

Основным показанием к назначению иммуногистохимии являются злокачественные новообразования. В онкологии данный метод применяется для поиска метастазов и патологических микроорганизмов, определения вида и локализации опухоли, а также с целью оценки активности патологического процесса. С помощью ИГХ можно установить окончательный или, реже, промежуточный диагноз при раке кожи (меланоме), саркоме, лимфогранулематозе, лимфолейкозе и лейкозе, типировать степень злокачественности процесса. Последнее крайне важно при нейроэндокринных образованиях, которые еще называют «скрытыми убийцами» из-за того, что их очень трудно распознать на ранних стадиях.

Иммуногистохимическое исследование часто проводят для того, чтобы избежать назначения агрессивного лечения токсичными препаратами

В отдельных случаях иммуногистохимический анализ позволяет установить источник метастазов, когда локализация первичного очага неизвестна, а также провести дифференциальную диагностику при нескольких новообразованиях разного происхождения.

ИГХ может назначаться при бесплодии, хронических патологиях эндометрия, матки и яичников, привычных выкидышах. Ее целесообразно делать и в том случае, если беременность не наступает после нескольких процедур ЭКО.

Иммуногистохимия поможет обнаружить наличие клеток, препятствующих зачатию, и определить дальнейшую тактику лечения бесплодия.

Рак молочной железы является наиболее часто встречающимся видом рака у женщин и второй по частоте причиной смерти, связанной с раком. Ранняя диагностика, своевременно и правильно проведенное лечение могут значительно повысить шансы на выздоровление. Традиционные техники иммуногистохимии (ИГХ) позволяют работать с очень небольшими образцами ткани. Это обстоятельство в сочетании с применением антител, специфичных по отношению к антигенам опухолевых клеток, делает данный метод эффективным средством в руках патоморфолога, занимающегося диагностикой и прогнозированием течения онкологических заболеваний.

Estrogen Receptor
Progesterone Receptor
HER-2/neu
Ki-67
p120 Catenin
CadherinE
«Золотой стандарт» диагностики опухолей молочной железы - гормональный профиль PR, ER, HER-2/neu, Ki-67 - это диагностика всех доступных рецепторов, которые отвечают за активность раковой ткани. Включает в себя исследование нескольких показателей.
PR, ER - это специфические белки-рецепторы, которые реагируют на выработку эстрогенов и прогестерона. Большинство раковых образований молочной железы (около 80 процентов) активно реагируют на изменения фона гормонов. Определение реактивности этих рецепторов играет важнейшую роль при оценке возможностей терапии гормонами.
HER-2/neu - это генная белковая структура, которая расположена в раковой ткани. Представляет собой рецептор, который реагирует на выработку специфических антител. Исследовать данный параметр целесообразно с точки зрения определения прогноза лечения рака. При высокой активности HER-2/neu опухоль плохо поддается лечению, требуется сначала моноклональная терапия, направленная на подавление активности этой структуры.
Ki-67 - это белковая структура, обладающая способностью активизироваться при активном росте опухоли. Исследование этого показателя дает возможность оценить прогноз для жизни больного. Чем выше экспрессивные характеристики Ki-67, тем меньше опухолевая дифференцировка, тем меньше шансов у больной женщины на выздоровление.

Опухоли предстательной железы

Рак предстательной железы – одно из самых распространенных онкологических заболеваний в мире. Большинство случаев (50 – 70%) диагностируется на 3-4 стадиях, в том числе 25% - с генерализацией опухолевого процесса. К сожалению, ранняя диагностика рака затруднена из-за частого отсутствия характерных симптомов. Наряду с клиническими методами, наиболее информативным является метод гистологического исследования биоптатов предстательной железы.

Основные диагностические маркеры:

p63 ;
PSAP (ProstaticAcidPhosphatase) ;
PSA (Prostate Specific Antigen) ;
P504s (= AMACR - Alpha methylacyl-CoA-racemase) ;
Cytokeratin High Molecular Weight (34betaE12) ;
ERG (ETS Related Gene) ;
PSMA (Prostate Specific Membrane Antigen) ;
Androgen Receptor ;
Bcl-X ;
Cytokeratin 5 & 6 ;
Cytokeratin Pan ;
Keratin 8 ;
Cytokeratin 8 & 18 ;
Ki-67 ;
p53 ;
Synaptophysin ;
Basal Cell Cocktail - Cytokeratin HMW + p63 .

Опухоли легкого

Рак легкого является одной из наиболее частых причин смерти. В мире ежегодно от данного заболевания умирает около 1 миллиона человек. У мужчин рак легкого в 85-90% случаев связан табакокурением. Прогноз при раке легкого остается неблагоприятным. При отсутствии лечения с момента установления диагноза в течение 2 лет погибает до 90 % больных. При хирургическом лечении 5-летняя выживаемость составляет около 30%. Хирургическое лечение в сочетании с лучевой и медикаментозной терапией увеличивает 5-летнюю выживаемость на 40 %. Наличие метастазов значительно ухудшает прогноз. Современная диагностика и лечение больных раком легкого не может обходиться без морфологической верификации опухоли с уточнением гистологической структуры и степени анаплазии (дифференцировки) опухолевых клеток. Иммуногистохимический метод остается одним из самых информативных методов на данном этапе диагностики

Основные диагностические маркеры:

Thyroid Transcription Factor-1 ;
Cytokeratin 7 ;
НЕМЕЛКОКЛЕТОЧНЫЙ РАК ЛЕГКОГО
- ALK (DE5F3);
ПЛОСКОКЛЕТОЧНЫЙ РАК ЛЕГКОГО
- Cytokeratin 14;
- Cytokeratin 5/6;
- EGFR;
МЕЛКОКЛЕТОЧНАЯ КАРЦИНОМА ЛЕГКОГО
- ChromograninA;
- Synaptophysin;
АДЕНОКАРЦИНОМА ЛЕГКОГО
- CytokeratinPan.

Меланома

Мелано́ма (лат. melanoma, melanoma malignum от др.-греч. μέλας - «черный») (уст. Меланобластома) - злокачественная опухоль, развивающаяся из меланоцитов - пигментных клеток, продуцирующих меланины. Одна из трёх разновидностей рака кожи, и самая опасная из них. Преимущественно локализуется в коже, реже - сетчатке глаза, слизистых оболочках (полость рта, влагалище, прямая кишка). Одна из наиболее опасных злокачественных опухолей человека, часто рецидивирующая и метастазирующая лимфогенным и гематогенным путем почти во все органы. Верификация меланомы кожи и ее метастазов остается одной из наиболее сложных задач для онкоморфолога. Среди беспигментных меланом встречаются узловые, поверхностно-распространяющиеся, типа лентиго, светлоклеточные, веретеноклеточные, плеоморфные, мелкоклеточные, миксоидые, «невоидные», перстевидноклеточные и другие формы.

Основные диагностические маркеры:

MelanomaAssociatedAntigen (MAA) ;
CD63 ;
Melanoma Marker (HMB45) ;
MART-1/Melan-A ;
Melanoma (gp100) ;
Tyrosinase ;
Microphthalmia Transcription Factor (MiTF) ;
Nerve Growth Factor Receptor (NGFR) ;
S100 ;
Melanoma Pan (HMB45 + A103 + T311) ;
MART-1 + Tyrosinase ;
Vimentin .

Стандартная панель содержит около пяти иммуногистохимических маркеров:

р53 - степень активности митоза меланомы;
Ki-67 - оценка интенсивности пролиферации, определяет прогноз болезни;
bcl-2 - белок, который препятствует естественному апоптозу меланомы кожи, оценивается вероятность метастазирования;
HMB-45 - оценка функции меланоцитов;
S-100 - типичный антиген, встречающийся только при меланоме, позволяющий отличить от других опухолей или доброкачественных образований.

Лимфопролиферативные заболевания

Лимфома – злокачественное опухолевое заболевание лимфатической системы. Среди лимфом выделяют лимфогранулематоз (лимфому Ходжкина) и все остальные виды лимфом - неходжкинские лимфомы (НХЛ). По тому, из каких именно видов лимфоидных клеток возникает опухоль, выделяют В-, Т- и (редко) NK-клеточные лимфомы. Большинство лимфом – В-клеточные. Диагностика лимфопролиферативных заболеваний в настоящее время занимает передовые позиции в современной патологии и требует одну из самых обширных панелей маркеров. Суммарная заболеваемость всеми видами неходжкинских лимфом в европейских странах составляет 12-15 случаев на 100 тысяч населения в год. Риск их возникновения увеличивается с возрастом. Инфицирование вирусом Эпштейна-Барр связано с повышенным риском заболевания различными видами лимфом, включая лимфому Беркитта. У детей неходжкинские лимфомы сравнительно редки: к детскому и подростковому возрасту относится не более 5% всех случаев НХЛ. Однако все же лимфомы занимают в структуре злокачественных заболеваний детского возраста третье место по частоте – после лейкозов и опухолей центральной нервной системы.

Основные диагностические маркеры:

Стромальные опухоли желудочно-кишечного тракта (СОЖКТ)

СОЖКТ возникают преимущественно в желудке (60 %) и тонком кишечнике (25 %), но также наблюдаются в прямой кишке (5 %), пищеводе (5 %) и ряде других мест (5 %), в том числе аппендикс, желчный пузырь, мезентерий и сальнике. Возраст заболевших пациентов колеблется в диапазоне от подросткового возраста до 90-летних, но большинство больных старшего возраста с пиком около 60 лет. В большинстве исследований наблюдается незначительная предрасположенность мужчин. В 1998 было показано, что СОЖКТ экспрессирует тирозинкиназный рецептор KIT (CD117). Причиной возникновения этих опухолей оказались интерстициальные клетки Кахаля (ICC). Подобно СОЖКТ, клетки Кахаля экспрессируют KIT и большинство положительно на CD34. Последующие исследования с большим числом разных лабораторий подтвердили, что KIT – это единственный наиболее специфичный маркер СОЖКТ. Иммуноопределяемый KIT присутствует на клеточной поверхности и/или в цитоплазме опухолевых клеток СОЖКТ приблизительно в 90 % случаев. В подавляющем большинстве опухолей экспрессия KIT бывает сильной и однородной, но в некоторых случаях демонстрируется только фокальная положительная реактивность и KIT отсутствует в небольшой подгруппе (~5%) опухолей, которые по другим мофологическим и иммунофенотипическим признакам соответствуют СОЖКТ. Среди KIT-положительных СОЖТК экспрессия CD34 определяется в 60-70 % случаев, тогда как 30-40 % имеют положительную реакцию на гладкомышечный актин (SMA), а 5% - на белок S-100. Ни один из этих антигенов не является специфичным для СОЖКТ. Экспрессия десмина в истинных KIT-положительных СОЖКТ является крайне редкой (1-2 % случаев) и обычно фокальной. Данная форма онкологических заболеваний тяжело поддается морфологической диагностике. Используя современные панели маркеров возможно четко и обоснованно диагностировать разные формы описываемой патологии. Иммуногистохимическоее исследование является обязательным.

Основные диагностические маркеры:

CD117 c-kit ;
CD34 ;
Desmin ;
Beta-Catenin ;
S100 ;
GFAP ;
CD99 ;
ActinSmoothMuscle .

Колоректальный рак

Колоректальный рак является третьим по частоте диагностируемым раком в Соединенных Штатах (за исключением рака кожи) среди мужского и женского населения. Показатели заболеваемости колоректальным раком снижаются на протяжении последних двух десятилетий (с 66,3 случаев на 100000 человек в 1985 году до 45,5 случаев в 2006 году). Это связывают с увеличением использования колоректальных скрининг-тестов, которые позволяют обнаруживать и удалять полипы ЖКТ до их перерождения в рак. В отличие от общего сокращения, среди взрослого молодого населения в возрасте до 50 лет, для которого скрининг не рекомендуется из-за средней степени риска, заболеваемость раком ободочной и прямой кишки увеличивались с 1994 года примерно на 2% в год у мужчин и женщин. В 2016 году США смертность от колоректального рака составила 49500 случаев. Смертность от колоректального рака снизились в обоих группах мужчин и женщин за последние несколько десятилетий, с более крутым снижением в последний период времени. Это снижение отражает снижение показателей заболеваемости и улучшение ранней диагностики и лечения. Ранние стадии рака ободочной и прямой кишки обычно не имеют симптомов, поэтому, чтобы выявить заболевание на этой ранней стадии часто необходим скрининг. Прогрессирование болезни может вызвать кровотечение из прямой кишки, появление крови в кале, изменение в опорожнении кишечника, схваткообразные боли в нижней части живота. Применение ИГХ при раках толстого кишечника рассматривается на нескольких уровнях: для характеристики опухолей (эндокринный или эпителиальный тип), наследственной предрасположенности и для целей прогноза. Преобладающее использование ИГХ - это определение возможных или предполагаемых метастазов, в которых толстой кишки является возможным первичным. Типичной локализацией для метастазов толстой кишки являются печень и легкие, оба органа, которые могут производить морфологию рака идентичную метастазам из толстой кишки. ИГХ, (класс I правил регулирования FDA), используется после первичной диагностики опухоли путем гистопатологического исследования и не включается для клиницистов как независимое исследование.

Основные диагностические маркеры:

Beta-Catenin ;
BRAF ;
CDX-2 ;
COX-2 ;
Cytokeratin 7 ;
Cytokeratin 19 ;
Cytokeratin 20 ;
MLH1 ;
MLH2 ;
MLH6 ;
MSLN ;
MUC1 ;
MUC2 .

Метастатическая карцинома

Наиболее часто применение иммуногистохимии в изучении опухолей печени – это определение источника метастаза, когда первичная локализация опухоли не известна. Развитие и применение панели для иммунных окрашиваний может помочь решить почти все диагностические проблемы. 2-6 Цитокератины (CK) 7 и CK 20 – первая ступень в идентификации многих опухолей и с дополнительными иммунными реакциями относительно специфичными для опухолей женского и мужского полового тракта, нередко дает возможность идентифицировать первичную локализацию метастатической опухоли.

Основные диагностические маркеры:

Цитокератины различного молекулярного веса (CK 18, CK 19, CK 7, и CK 20 и др.).

НER2/neu - представляет собой мембранный белок, который кодируется геном ERBB2. Повышение его экспрессии имеет важное значение в патогенезе и прогрессировании определенных злокачественных процессов. Тестирование данного рецептора является важным биологическим маркером рака желудка, молочной железы, матки и ее придатков.;
Ki-67 - ядерный антиген, состоящий из двух полипептидных цепей и являющийся основной частью нуклеарного матрикса. Его экспрессия позволяет выделить пролиферирующие клетки опухолевидного образования, которые находятся в активной фазе жизненного цикла клетки. Данный маркер позволяет определить фенотип и скорость роста опухоли, риск ее метастазирования, потенциальную ответную реакцию на лечебные мероприятия и исход патологического процесса.

Опухоли желудка.

Иммуногистохимические исследования (ИГХ) , как правило, не требуются для оценки доброкачественных и злокачественных эпителиальных опухолей желудка, так как гистопатология, как правило, обеспечивает диагностику, но ИГХ нужна при изучении метастатического рака желудка, когда источник происхождения опухоли не ясен, или когда макроскопические / рентгенологическое проявления опухоли сбивают с толку (например, рак желудка напрямую и широко прорастает в печень и гистологически неотличим от холангиокарциномой). К тому же, ИГХ может быть полезна для идентификации некоторых вариантов желудочных карцином, включая гепатоидную аденокарциному, в которой печеночная дифференцировка может быть подтверждена позитивной реакцией на альфа-фетопротеин AFP. Аденокарциномы желудка будут реагировать со многими антителами против кератинов, включая, CK 18, CK 19, CK 7, и CK 20. Когда CK 7 и CK 20 используются вместе, многие аденокарциномы желудка будут окрашиваться как CK 7 так и CK 20. Примерно 25% случаев будет иметь фенотип CK 7 + / CK 20-, или CK 7- / CK 20+), и небольшое число случаев будет отрицательным для обоих маркеров. Первоначально считалось, что CDX-2 - специфический маркер для рака толстой кишки, будет реактивными в более чем 50% случаев и может быть свидетельством меньшей степени инвазивности. Аденокарцинома желудка, как кишечного типа, так и типа перстневидноклеточной карциномы, могут иметь нейроэндокринную дифференцировку и что может быть не очевидно по гистологической картине, но проявляться по окрашиванию хромогранином и /или синаптофизином

Определение экспрессии рецептора EGFR при опухолях эпителиальной природы

Иммуногистохимическое (ИГХ) определение экспрессии рецептора EGFR при колоректальном раке и опухолях легкого, а также при опухолях шеи и головы, проводят для адекватного выбора схем химиотерапевтического лечения.

EGFR (Epidermal Growth Factor Receptor) является одним из трансмембранных рецепторов, экспрессируется на поверхности эпителиальных клеток и принимает участие в регуляции роста клеток и дифференцировки. Деление клеток в его присутствии происходит намного быстрее. При активации рецептора EGFR после связывания с факторами роста (EGF и TGF-a), запускаются механизмы, которые приводят к росту опухоли и пролиферация раковых клеток повышается, также стимулируется процесс метастазирования.Экспрессия EGFR - это показатель, свидетельствующий о том, что рост опухоли стимулируется деятельностью рецептора эпидермального фактора роста. Так как активация рецептора происходит за счет веществ самого новообразования, то правильнее будет говорить о экспрессии EGFR опухолью.Экспрессия EGFR обнаружена при следующих формах рака: легких, шеи и головы, толстой и прямой кишки. Иммуногистохимическое определение экспрессии EGFR позволяет установить статус этих рецепторов и назначить лечение. Экспрессия EGFR напрямую связана со степенью злокачественности и стадией развития опухоли.Специалист в соответствии с полученными данными иммуногистохимического исследования классифицирует опухоль как EGFR-отрицательную или EGFR-положительную.

Гиперэкспрессия EGFR говорит о высокой злокачественности, поздних сроках развития опухоли и метастатических процессах. Этот фактор является неблагоприятным в отношении прогноза болезни и свидетельствует о высокой пролиферативной активности опухоли, агрессивности, устойчивости к проводимой терапии.

Низкая степень экспрессии EGFR свидетельствует о регрессе опухоли положительной динамике в лечении.

Иммуногистохимическое исследование рецепторной чувствительности к эстрогенам и прогестерону в эндометрии

Иммуногистохимическое исследование рецепторной чувствительности к эстрогенам и прогестерону в эндометрии проводится для выявления причин отсутствия фертильности, а также для оценки злокачественности процессов в тканях матки. Исследование сложное, проводится планово, необходима соответствующая квалификация патологоанатома.

Рецепторы к эстрогенам (ER) и прогестерону (PR) - это чувствительные маркеры, которые реагируют на колебания некоторых гормонов, влияющих на рост опухолей и развитие гиперпластических процессов в эндометрии. Расположены они как в тканях эпителия матки, так и в клетках молочной железы. Их определение дает возможность оценить влияние гормональных факторов на прогрессию злокачественного роста, а кроме того, выявить наличие других очагов активности, помимо маточного. Входят в программу обязательного скрининга у больных женщин с подозрением на инфильтративную активность рака.

Иммуногистохимическое исследование проводят при:

бесплодии;
опухолях эндометрия;
дисфункции менструаций;
гиперпластических процессов в эндометрии.

При бесплодии методика позволит выяснить, может ли плодное яйцо прикрепится к стенке матки. Для рака метод не является способом ранней диагностики. Оценка рецепторной активности позволяет выявить наличие метастазирования, и оценить эффективность лечения в полости матки. При нарушениях овуляции методика выясняет эффективность гормональной терапии. При изменениях в полости матки гиперпластического характера усиление активности рецепторов к эстрогенам и прогестеронусвидетельствует о развитии низкодифференцированных опухолей, потенциально опасных для жизни женщины.

Общий принцип результата - чем больше экспрессия рецепторной активности, тем выше вероятность прогрессирования опухоли. Чем ниже активность, тем меньше возможность естественного оплодотворения.

Хронический эндометрит

Хроническим эндометритом называют воспаление мукозного слоя матки, которое провоцируют различные вирусы или патогенные микроорганизмы. В патологическом очаге происходят морфологические и функциональные изменения эндометрия.Хронический эндометрит – клинико-морфологический синдром, при котором в результате повреждения эндометрия инфекционным агентом возникают множественные вторичные морфофункциональные изменения, нарушающие циклическую биотрансформацию слизистой оболочки матки, что приводит к стойкому нарушению менструальной и генеративной функций.Частота встречаемости хронического эндометрита в популяции составляет 2,6- 51%. Причём среди этих женщин бесплодны 60,4%, а неудачные попытки ЭКО и переноса эмбрионов отмечены у 37%. В 2006 г. Международная Федерация Гинекологии и Акушерства уравняла понятия «неразвивающаяся беременность» и «хронический эндометрит».

Причины хронического эндометрита:

инфекции органов малого таза, влагалища и цервикального канала;
внутриматочная спираль;
ранние интимные контакты;
радиотерапия тазовых органов;
хирургическое вмешательство в полость матки;
злоупотреблением алкоголем и курение.

Практикующие специалисты относят воспалительные процессы, происходящие в органах малого таза, к аутоиммунной патологии. Для определения характера нарушений и выявления пациенток с патологическим ответом иммунной системы, который провоцирует воспаление эндометрия, назначается иммуногистохимическое исследование, которое проводят с использованием стандартной панели моноклональных антител:CD16, CD20, CD138, CD56, HLA-DR.

Иммуногистохимическое исследование рецептивности эндометрия (окно имплантации)

Рецептивность эндометрия – комплекс структурно -функциональных характеристик эндометрия, определяющий способность его к имплантации. С начала 90-х годов прошлого столетия понятие «рецептивность эндометрия» начинает обретать своё современное значение как процесс сложной интеграции и многоуровневого «диалога» между эндометрием и эмбрионом в специфический период «окна имплантации».Продолжительность «окна имплантации» у человека составляет в среднем 4 дня: с 6-го по 8-10 - й день после пика секреции ЛГ, или 20-24 день менструального цикла (при 28 -дневном менструальном цикле).В настоящее время различают три уровня рецептивности: генетический, протеомный и гистологический. При открытии «окна имплантации» в эндометрии усиливается экспрессия 395 генов (АроЕ, PLA2) и снижается экспрессия 186 генов (ITF, различные протеазы, внеклеточные матриксные белки и др.). Среди протеомных маркёров, связанных с рецептивностью эндометрия, выделяют различные молекулы адгезии, факторы роста, цитокины и рецепторы: семейство IL-1, LIF и LIF-R, αVβ3, TNF-α, IFN-γ и др. Из них наиболее изученным является лейкемия-ингибирующий фактор (LIF) – член семейства IL-6. Максимальная его экспрессия в эндометрии наблюдается на 20-й день цикла.Третий уровень рецептивности – гистологический. «Окну имплантации» в эндометрии соответствует средняя стадия фазы секреции менструального цикла.Эндометрий может обладать рецептивными свойствами только в том случае, если молекулярные маркёры рецептивности выявляются точно в среднюю стадию фазы секреции менструального цикла.Одним из ключевых ультраструктурных образований, участвующих в формировании рецептивности, являются пиноподии. Это микроскопические выпячивания в апикальной части поверхностного эпителия эндометрия, образующиеся на месте микроворсинок в «окно имплантации» и выступающие в полость матки. Предполагают, что основные рецепторы для прикрепления бластоциты располагаются на поверхности пиноподий, где также концентрированно экспрессируется LIF.Любой дисбаланс в экспрессии стероидных рецепторов может привести к нарушению морфофункциональных свойств эндометрия, его рецептивности. Поэтому определение уровня ER и PR в среднюю стадию фазы секреции позволяет дополнить морфологическое исследование эндометрия, оценить его рецептивность. В норме показатель соотношения PR/ER в строме колеблется от 2 до 4.В среднюю стадию фазы секреции наблюдается физиологическое снижение уровня ERα в эндометрии. Это – критическое событие, освобождающее от подавляющего влияния определённые гены и обеспечивающее сигнал для начала внутриматочной рецептивности.

Гиперэкспрессия ER α в среднюю стадию фазы секреции вызывает нарушение экспрессии биологических маркёров имплантации, нарушает рецептивность эндометрия.

Программа комплесного исследования состоит из следующей панели антител: ER, PgR, CD56, CD138, LIF, а также подсчет количества пиноподий.

Давайте для начала мы разберем, что же такое иммуногистохимическое исследование. Под ним подразумевается микроскопическое исследование ткани, которое основано на выявлении антител на патологические вещества.

Разделяют два метода исследования:

прямой (прямая реакция антител непосредственно на патологическое вещество);
непрямой метод (патологические вещества, распознаются с помощью вторичных антител).

Способы маркировки:

ферменты - белковые молекулы, они же молекулы РНК. Так например: щелочная фосфатаза (фермент гидролаза);
флуоресцентные - тот же физический процесс, например - флуоресцеин - органическое соединение;
электроно-плотные частицы, к таким относится золото.

Используют для:

изучения и исследования секреторных процессов, в том числе синтетических;
распознавания гормонов рецепторов;
выявления различных типов, родов клеток по их свойствам.

Для чего используют иммуногистохимию при раке молочной железы

В области исследования грудной железы данное исследование используется в качестве предварительной диагностики для установления точного диагноза, в том числе при злокачественных образованиях. Данное исследование дает возможность определить следующее:

Точное образование (доброкачественное или злокачественное) и назначение правильного лечения.
Точное месторасположение (наличие метастаз в организме и их дислокацию).
Первоначальный очаг заболевания.
Стадию заболевания (например, степень рака).
Пролиферацию клеток (распознать скорость размножения и развития раковых клеток).
Ответ раковых клеток на медикаменты, их чувствительность, также можно отследить чувствительность к химиотерапии, к лучевой терапии.

Исследование способно детально изучить заболевание, что дает возможность полностью диагностировать заболевание и подобрать правильное лечение. Это играет не маловажную роль в диагностике, лечении, продолжительности жизни онкологических больных. Также можно сказать, что с помощью данного метода можно:

Показания к исследованию

В основном данная диагностика используется для изучения (исследования) любой ткани человеческого организма. Основа для проведения данного исследования - это любое новообразование, которое предполагает развитие рака. Также исследование проводится для изучения эндометрия:

при метастазах;
при бесплодии;
после неудачных попыток ЭКО;
при различных заболеваниях матки;
при различных видах патологий органов малого таза;
при постоянных невынашивания плода;
при заболевания эндометрия.

Исследование не имеет абсолютных противопоказаний. Препятствием для ИГХ может быть, только невозможность по каким либо причинам забора материла на исследование.

Как происходит исследование

Данный вид исследования может проводится только в специализированных лабораториях, при этом врач должен иметь специальную квалификацию, пройти специальное обучение.

Забор проходит непосредственно пораженного участка кожи с помощью биопсии. Также забор материала может происходить во время хирургического вмешательства на молочной железе.

Потом полученный материал специально обрабатывается и консервируется. Для этого она заливается парафином. В таком виде, в парафине, материал может правильно храниться в течении многого времени.

Следующим этапом является микротомирование. Материал нарезают на тонкие пласты при помощи специального аппарата.

В дальнейшим нарезанные пласты окрашиваются с определенными антителами и все это изучается под микроскопом. В некоторых лабораториях изучается окрашенный материал на автоматическом приборе.

ИХГ Эндометрия

Показания:

две-три неуспешных процедур ЭКО;
не первое (постоянное) невынашивание плода на ранних сроках;
бесплодие.

Во время исследования могут выявить такие заболевания как:

эндометрит,
гиперплазия,
неполную трансформацию эндометрия,
нарушение фаз развития
и другие заболевания.

Как показывает практика, именно заболевания, связанные с эндометрием на 73% являются причиной бесплодия.

Подготовка к исследованию

Данное исследование проводится в определенный день менструального цикла, обычно на 5-7 день смотрят воспалительные процесса эндометрия, на 20-24 день цикла - оценивают секрецию, смотрят рецепторную функцию.

не принимать гормоны за неделю до анализа;
не принимать кровоостанавливающих препаратов;
правильная интимная гигиена.

Как проходит процедура

Процедура происходит на гинекологическом кресле. Женщину обезболивают специальными препаратами и вводят зеркало. Делается санация половых органов. Вводится специальный прибор - система гистероскопа и проводится забор. Далее убирают прибор, проводя санацию органов.

Потом женщина находится под наблюдением врача до полного восстановление, примерно 1-2 часа.

Результаты примерно готовятся 3-5 дней. Оценить результаты может только специалист.

Результаты ИХГ молочной железы

Что определяет анализ:

HER2neu или, по-другому говоря, человеческий рецептор эпидермального фактора роста. Несет ответственность за продукцию белка. При поражении раковых клеток усиливается беспорядочный рост.

Если результат пишется 1 (+), то это говорит о том, что избытка белка нет, следствие - нехорошее состоянии опухоли.

При 2 (++) обычно назначают повторное исследование.

При 3 (+++) рассматривают как положительную опухоль, которую обычно подвергают медикаментозному лечению.

ER uPR данный вид гормонов способствует стимуляции роста патологических тканий. Если данные показатели увеличены, то это говорит о правильном лечении, что опухоль реагирует на гормонотерапию. Следовательно, если данные показатели понижены, то можно говорить о неправильном подборе лекарств. Опухоль развивается дальше.

Ki - 67, по данному показателю оценивают стадию опухоли и её характеристики. Если результат дает повешенные цифры, то это говорит о быстром течении заболевания, наличии метастаз и, к сожалению, совсем не хороший прогноз. Данный результат отмечается в процентах. Так например:

11% - вполне хороший прогноз (выздоровление 93%);
21 % - говорят о нем как 50% на 50%, все зависит от организма человека;
все показатели за 30% - оценивают как тяжелая стадия - высокоагрессивная;
90% - неизлечимо, приводит к смерти.

Так же данный индекс способствует к определению выбора лечения.

Ген p53 - способствует предотвращению роста патологической ткани. Данный ген является барьером для заболевания. Для начала заболевания служит мутация гена, например, наследственность или нарушение белковой матрицы.

VEGF - обозначается белок, которой несет функцию контроля жизнедеятельности ткани при условии недостаточного кровообращения. Высокие показатели данного белка говорит о росте опухолевой ткани, в следствии «хорошего» питания ткани.

В основном выделяют 4 типа рака:

Люминальный А - при этом: к женским гормонам рецепторы положительны, к HER2- отрицательные, показатель ki- 65-13% меньше.
Люминальный В - при этом: к женским гормонам рецепторы положительны, к HER2- отрицательные, показатель ki- 65-15% меньше.
Erb - B2 - при этом: реакция рецепторов к прогестерону (эстрогену) отрицательная, к HER2- положительная.
Базальноподобный - отрицательный показатель по всем категориям.

Определение экспрессии белков PD-1, PDL-1 и PDL-2

Принято считать, что отвечают за саму опухоль - PD-1, PDL-1 и PDL-2. Но они могут присутствовать не во всех патологических тканях. Для точного определения и назначения правильной терапии всем пациенткам, которым непосредственно показана иммунотерапия проводится такое исследование, как экспрессия белков PD-1, PDL-1 и PDL-2.

Данное исследование проводят с помощью флуоресцентной гибридизации FISH. В результате наличия экспрессии иммунотерапия назначается такими препаратами, как: Ниволумаб, Атезолизумаб, Пембролизумаб.

Цена иммуногистохимического исследования

Иммуногистохимическое исследование очень сложный анализ, в котором используются множественное количество онкомаркеров.

Стоимость исследования зависит от количества проверяемых факторов. Цена исследования начинается от 4 тысяч рублей и до 20 тысяч рублей.

Видео: Иммуногистохимические исследования

medik-24.ru

Иммуногистохимическое исследование: расшифровка и особенности проведения

Важнейшим пунктом при диагностике раковых заболеваний является иммуногистохимическое исследование. Ежедневно в организм человека проникают микроорганизмы, способные запустить развитие патологического процесса. Защитные силы противостоят этому, образуя антитела. Эта реакция и легла в основу создания ИГХ-исследования.

Суть метода

Данный способ диагностики раковых заболеваний является наиболее современным и достоверным. В процессе развития опухолевого процесса образуются чужеродные организму белки – антигены. В это же время иммунная система вырабатывает антитела, главная цель которых – предотвращение размножения патогенных микроорганизмов.

Задачей иммуногистохимического исследования является своевременное выявление раковых клеток. Для этого биологический материал пациента обрабатывается множеством антител, после чего тщательно изучается под микроскопом. Если данные белковые соединения свяжутся с опухолевыми клетками, будет визуализироваться их свечение. Возникновение эффекта флюоресценции и свидетельствует о наличии в организме раковых клеток.

На сегодняшний день в распоряжении специалистов, осуществляющих ИГХ-исследование, имеются практически все антитела к различным видам опухолей, что служит залогом получения достоверных результатов.

Возможности

Современный вид диагностики позволяет определить:

распространение опухолевого процесса;
скорость роста злокачественных новообразований;
вид опухоли;
источник метастазов;
уровень злокачественности.

Кроме того, с помощью иммуногистохимического исследования может оцениваться степень эффективности лечения раковых заболеваний.

Показания и противопоказания

С помощью данного способа существует возможность изучения любых тканей человеческого организма. Главным основанием для назначения иммуногистохимического исследования является подозрение о наличии злокачественного образования.

В этом случае метод используется для:

определения вида опухоли и области её локализации;
обнаружения метастазов;
оценки активности опухолевого процесса;
выявления патологических микроорганизмов.

Также анализ эффективен при проблемах с зачатием.

Иммуногистохимическое исследование эндометрия показано при:

бесплодии;
заболеваниях матки;
наличии патологий в органах репродуктивной системы;
невынашивании беременности;
хронических заболеваниях эндометрия.

Кроме того, ИГХ-исследование назначается пациенткам, у которых не наступает беременность даже после нескольких попыток экстракорпорального оплодотворения. Метод позволяет определить, имеются ли в организме клетки, снижающие вероятность зачатия.

Противопоказаний к ИГХ-исследованию не существует. Единственным фактором, из-за которого невозможно провести анализ, является непреодолимая сложность при заборе биоматериала пациента.

Как проводится

В первую очередь методом биопсии получают образец ткани больного. Реже забор материала осуществляется в процессе эндоскопического обследования или хирургического вмешательства. Способ получения образца зависит от вида опухоли и её локализации.

Важным нюансом является то, что забор материала при первичном обследовании должен осуществляться до начала лечения. В противном случае результаты исследования могут быть искажены.

После забора биоматериала его помещают в формалин и отправляют в лабораторию, где он подвергается следующей обработке:

Образец ткани обезжиривается и заливается парафином. В данном виде биологический материал может храниться очень долго, за счёт чего ИГХ-исследование может быть проведено повторно.
С образца собирают несколько тонких срезов и перемещают их на специальные стёкла.
На них биоматериал окрашивается растворами различных антител. На данном этапе может применяться как малая панель, так и большая. В первом случае изучаются реакции после использования 5 видов антител, во втором – до нескольких десятков.
В процессе иммуногистохимического исследования при раке любого органа появляется эффект флюоресценции, что даёт возможность специалисту определить вид злокачественных клеток.

Интерпретация результатов

Как правило, заключение готово через 7–15 дней. Срок зависит от вида используемой панели (малой или большой). Расширенный способ занимает больше времени.

Изучением срезов биоматериала занимается патологоанатом, имеющий знания и навыки (подтверждённые официальным документом), необходимые для проведения анализа.

При интерпретации результатов особое внимание обращается на показатель Ki-67. Именно он предоставляет информацию о степени злокачественности процесса. Например, если результат показателя после проведения иммуногистохимического исследования при раке молочной железы составляет не более 15%, считается, что прогноз более чем благоприятный. Уровень в 30% свидетельствует об активности опухолевого процесса, т.е. о быстрой скорости его развития. Как правило, она останавливается после курса химиотерапии.

По некоторым статистическим данным, если Ki-67 составляет менее 10%, итог заболевания будет благоприятным (в 95% случаев). Отметка в 90% и выше означает почти 100%-ный летальный исход.

Кроме показателя злокачественности, в заключении указываются:

антитела, к которым выявлено сходство (тропность);
вид раковых клеток, их количественное значение.

Важно понимать, что точный диагноз ставится после получения и изучения информации, собранной посредством всех проведённых диагностических процедур. Несмотря на то, что ИГХ-анализ считается наиболее информативным методом по сравнению с гистологией, иногда необходимо использовать оба способа. Расшифровкой иммуногистохимического исследования занимается исключительно онколог.

В заключение

В современной медицине особое внимание уделяется диагностике раковых заболеваний. Наиболее современным и информативным методом считается иммуногистохимическое исследование. С его помощью выявляется не только наличие раковых клеток, но и определяется их вид и скорость развития злокачественного процесса. Кроме того, на основании результатов производится оценка эффективности назначенного лечения.

fb.ru

ИГХ исследование молочной железы - расшифровка

Иммуногистохимическое исследование (ИГХ) – метод исследования железистой ткани груди, при котором используется специальный реактив, позволяющий получить полную характеристику клеток:

установить происхождение клеток опухоли;
определить ее структуру;
диагностировать первичное образование по имеющимся метастазам;
точно вычислить продолжительность заболевания, возраст опухли;
определить правильную методику лечения.

Анализ ИГХ молочной железы назначается как при подозрении на онкологический процесс, так и при его течении, с целью диагностики результативности проводимого химиотерапевтического лечения.

Что позволяет определить ИГХ?

Для начала необходимо сказать, что расшифровкой результата ИГХ исследования молочной железы должен заниматься исключительно врач. Только он, зная полностью особенности течения заболевания, может интерпретировать полученный результат.

ИГХ, проводимое при раке молочной железы, определяет характер опухоли. Наиболее часто при ИГХ молочной железы используют определение рецепторов:

эстроген (ER);
прогестерон (PR).

Установлено, что опухоль, содержащая большое количество данных рецепторов ведет себя неагрессивно, малоактивна. При лечении такой формы, гормональная терапия значительно эффективна. Благоприятный прогноз в 75% случаев.

При расшифровке результатов анализа ИГХ молочной железы используют процентные единицы измерения. При этом определяется соотношение числа клеток с экспрессией (восприимчивости) к эстрогенам и прогестерону, общему количеству клеток опухоли. При этом результат выводится в виде соотношения числа ядер окрашенных клеток к неокрашенным, в совокупности к 100 клеткам.

В виду сложности подобных вычислений их интерпретации, оценка результата занимаются исключительно специалисты.

Статьи по теме:

Грудь увеличилась и болит

Гормональные колебания влияют на самочувствие женщины, изменение уровня гормонов сильно отражается и на груди. Далее обсудим, почему грудные железы могут внезапно увеличиваться и болеть.

Грудь чрезвычайно чувствительна к любым гормональным колебаниям в организме, и первой реагирует непривычными ощущениями. Нередко женщина чувствует покалывания или сильные колющие боли. С чем это может быть связано, - разберемся далее.

Почему на груди растут волосы?

Часто, особенно после рождения малыша, женщины и юные девушки обнаруживают на груди нежелательные волоски. В чем причина роста волос в этой интимной части тела, разберемся в нашей статье.

Дуктэктазия молочной железы - что это такое?

Некоторые сбои в работе репродуктивной системы могут приводить к патологическому расширению протоков грудных желез. Чтобы быть в курсе проблемы, стоит изучить подробнее, что же это такое – дуктэктазия.

womanadvice.ru

Иммуногистохимическое исследование при раке молочной железы

При подозрении на наличие у пациентки злокачественной опухоли внутри молочной железы, врач обязан назначить комплексное исследование больного участка органа. Некоторые из видов обследования являются стандартными, и входят в основу медицинского протокола при выявлении онкологии в грудной клетке. Не каждое новообразование, обнаруженное в груди можно сразу же диагностировать, как злокачественное. Чтобы сделать такое заключение, онколог обязан отправить женщину на иммуногистохимическое исследование при раке молочной железы.

Только после того, как в биологическом материале опухоли будут обнаружены раковые клетки, имеющие патогенные свойства, способные к активному делению и распространению за пределы молочной железы - новообразование получает статус злокачественного.

Как происходит иммуногистохимическое исследование груди

После обнаружения в молочной железе нового образования, одним из обязательных анализов для проведения является иммуногистохимия. Суть ее выполнения заключается в том, что врачи проводят небольшую хирургическую операцию.

На больной груди делается микророзрез, в который вводят специальное оборудование, отбирающее часть ткани опухоли. Пациентка при этом находится под действием наркоза. После получения биологического материала новообразования, его обрабатывают специфическими антителами. Злокачественная опухоль вырабатывает свои агрессивные агенты, которые имеют белковую структуру.

Также они наделены способностью взаимодействовать с другими биологическими веществами, связывать их, и формировать с ними единую ткань. По итогам обработки опухолевого материала антигенами, ткань помещают под микроскоп для детального визуального исследования.

Фрагмент доброкачественной опухоли после обработки антителами не меняет свой цвет, а клеточная структура биопата и антител остается неизменной, активного контакта между ними не происходит. Клетки злокачественного образования ведут себя совершенно по-другому, и это хорошо видно сквозь линзу микроскопа.

Альтернативные названия: ИГХ, англ.: Immunohistochemistry или IHC.

Иммуногистохимическое исследование - особый метод диагностики опухолевых заболеваний. Суть метода заключается в изучении под микроскопом образов тканей, предварительно обработанных специфическими антителами.

Опухолевые клетки продуцируют специфические белки (антигены), которые способны связываться с определенными антителами. Во время проведения ИГХ образец ткани обрабатывается различными стандартными антителами, а затем исследуется под микроскопом. Антитела, связанные опухолевыми клетками обладают свойством флуоресценции – способностью светиться под лучами с определенной длиной волны. Это свечение и позволяет определить раковые клетки.

В настоящее время созданы антитела практически ко всем опухолям.

С помощью иммуногистохимического исследования выполняется:

определение вида и подвида опухоли;
определение распространенности онкологического очага;
при исследовании метастазов определяется их источник;
оценка эффективности лечения онкозаболеваний;
определение степени злокачественности опухоли;
выясняется пролиферативная активность опухолей (с какой скоростью они растут).

Показания для иммуногистохимического исследования

С помощью этого метода можно исследовать любые ткани. Главным показанием к проведению является подозрение на опухолевый процесс.

Определены следующие показания для ИГХ:

иммунофенотипирование первичных солидных (одиночных) опухолей;
иммунофенотипирование метастазов;
определение прогноза исхода опухолевого процесса;
исследование рецепторов к различным гормонам;
иммунофенотипирование лимфопролиферативных состояний;
определение микроорганизмов.

Противопоказания

К данному методу исследований нет противопоказаний. Его проведение невозможно лишь в том случае, если нет возможности получить биопсийный материал.

Как проводится иммуногистохимическое исследование

Само исследование состоит из четырех этапов:

Долабораторный этап, заключающийся в получении адекватного образца ткани для анализа. Ткань для исследования может быть получена с помощью инцизионной или эксцизионной биопсии, punch-biopsy (с помощью щипцов) или же в ходе эндоскопической операции. Процедура получения биоптата, а также подготовка к ней, определяются видом и локализацией опухоли. Полученную ткань помещают в 10% раствор формалина и отправляют в лабораторию.
Подготовка, в ходе которой производится обработка биоптата с последующим первичным его изучением. На этом же этапе из кусочка ткани готовят тончайшие срезы.
Окрашивание срезов иммуногистохимическими препаратами, представляющими собой раствор специфических антител. В зависимости от того сколько различных типов антител использую, выделяют малую и большую панели исследования. В малую панель входит до 5 антител, в большую – от 6 и до нескольких десятков. Количество определяемых маркеров зависит от предполагаемого диагноза.
Исследование и анализ окрашенных образцов, после которого выносится заключение.

Результаты исследования становятся известны через 7 дней (при стандартном исследовании – «малая панель») или через 15 (расширенное исследование – «большая панель»).

Интерпретация результатов

Изучением образцов занимается врач-патологоанатом, прошедший специальную подготовку по ИГХ. В заключении врач отмечает, к каким антителам определена тропность (сродство) ткани. Дополнительно описывается морфологическая структура образца – какие клетки и в каком количестве присутствуют.

Выявление сродства ткани к определенным стандартным опухолевым антителам свидетельствует о конкретном виде онкологического заболевания.

Дополнительная информация

Иммуногистохимическое исследование в настоящее время является наиболее точным методом диагностики опухолевых заболеваний. Оно позволяет с точностью до 99% поставить окончательный диагноз, определить вид опухоли, выявить ее первичную локализацию.

Литература:

Проект приказа Минздрава России от 21 ноября 2012 г. «Об утверждении Порядка оказания медицинской помощи по профилю «патологическая анатомия»
Иммуногистохимические методы: руководство. Пер. с англ. под ред. Г.А. Франка и П.Г. Малькова // М., 2011, – 224 с.